CAJ | 학술논문

背景与目的:基因转移效率一直以来都是用表达报告基因的细胞(显色或发荧光)占细胞总数的百分比(即转染率)来表示,此百分比是由研究者借助显微镜(或荧光显微镜)计数得出来的.该方法(本文称为人工计数法)存在客观性、准确性不够和工作量大、且不能同时检测基因表达效率等问题.本研究拟寻找一种客观、准确、简便地检测基因转移和表达效率的新方法.方法:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为目的基因、重组腺病毒(AdCMV/GFP)为基因载体,用人工计数法测定其对肝癌细胞株HepG2的转染率;用流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定其对肝癌细胞株HepG2、Bel7402、Hep3B、SMMC7721和鼻咽癌细胞株CNE-2的转染效率和GFP(绿色荧光蛋白)基因的表达效率(以荧光指数表示).结果:以FCM测得AdCMV/GFP对HepG2的转染率与载体量呈对数相关(与人工法相似,但前者略高),荧光指数与载体量呈线性相关(r=0.9984),其它细胞株的结果与HepG2相似.结论:采用FCM法测定基因转移效率克服了主观因素的影响,测定结果客观准确,可以用于测定基因载体对真核细胞的转染效率,或研究转录调控元件的功能.
배경여목적:기인전이효솔일직이래도시용표체보고기인적세포(현색혹발형광)점세포총수적백분비(즉전염솔)래표시,차백분비시유연구자차조현미경(혹형광현미경)계수득출래적.해방법(본문칭위인공계수법)존재객관성、준학성불구화공작량대、차불능동시검측기인표체효솔등문제.본연구의심조일충객관、준학、간편지검측기인전이화표체효솔적신방법.방법:이록색형광단백(GFP)기인위목적기인、중조선병독(AdCMV/GFP)위기인재체,용인공계수법측정기대간암세포주HepG2적전염솔;용류식세포술(flow cytometry,FCM)측정기대간암세포주HepG2、Bel7402、Hep3B、SMMC7721화비인암세포주CNE-2적전염효솔화GFP(록색형광단백)기인적표체효솔(이형광지수표시).결과:이FCM측득AdCMV/GFP대HepG2적전염솔여재체량정대수상관(여인공법상사,단전자략고),형광지수여재체량정선성상관(r=0.9984),기타세포주적결과여HepG2상사.결론:채용FCM법측정기인전이효솔극복료주관인소적영향,측정결과객관준학,가이용우측정기인재체대진핵세포적전염효솔,혹연구전록조공원건적공능.