苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2007年
1期
4-7
,共4页
范磊%沈飞%谢丽倩%周梦云%阮长耿
範磊%瀋飛%謝麗倩%週夢雲%阮長耿
범뢰%침비%사려천%주몽운%원장경
Mer%IgG样区%原核表达%单克隆抗体
Mer%IgG樣區%原覈錶達%單剋隆抗體
Mer%IgG양구%원핵표체%단극륭항체
目的 利用原核蛋白表达载体,体外表达Mer的IgG样区,并利用此重组蛋白制备抗Mer的单克隆抗体.方法 从K562细胞中抽提总RNA,利用RT-PCR扩增Mer的IgG样区片断.经过测序将所得片断与PQE30原核表达载体连接并转化到大肠杆菌M15中,挑选阳性克隆,经诱导和纯化后获得原核蛋白.利用所得的重组蛋白免疫Balb/e小鼠,取其脾脏和小鼠杂交瘤细胞融合制备针对Mer的IgG样区的特异性抗体.利用ELISA方法筛选阳性克隆,Westernblot方法进行验证.结果 体外成功表达MerIgG样区的原核蛋白,片断大小经修饰后约为26 kd,表达量占菌体总蛋白的15%,经Ni-NTA agrose柱纯化后得到纯化蛋白并免疫Balb/c小鼠.将小鼠脾脏细胞和杂交瘤细胞融合后得到1株特异性抗MerIgG样区的单克隆抗体--SZ-128,Westernblot显示此单抗可以和表达的重组蛋白和Mer胞外区真核蛋白反应.结论 成功制备1株抗MerIgG样区的特异性单克隆抗体,为研究Mer的功能提供了有力的工具.
目的 利用原覈蛋白錶達載體,體外錶達Mer的IgG樣區,併利用此重組蛋白製備抗Mer的單剋隆抗體.方法 從K562細胞中抽提總RNA,利用RT-PCR擴增Mer的IgG樣區片斷.經過測序將所得片斷與PQE30原覈錶達載體連接併轉化到大腸桿菌M15中,挑選暘性剋隆,經誘導和純化後穫得原覈蛋白.利用所得的重組蛋白免疫Balb/e小鼠,取其脾髒和小鼠雜交瘤細胞融閤製備針對Mer的IgG樣區的特異性抗體.利用ELISA方法篩選暘性剋隆,Westernblot方法進行驗證.結果 體外成功錶達MerIgG樣區的原覈蛋白,片斷大小經脩飾後約為26 kd,錶達量佔菌體總蛋白的15%,經Ni-NTA agrose柱純化後得到純化蛋白併免疫Balb/c小鼠.將小鼠脾髒細胞和雜交瘤細胞融閤後得到1株特異性抗MerIgG樣區的單剋隆抗體--SZ-128,Westernblot顯示此單抗可以和錶達的重組蛋白和Mer胞外區真覈蛋白反應.結論 成功製備1株抗MerIgG樣區的特異性單剋隆抗體,為研究Mer的功能提供瞭有力的工具.
목적 이용원핵단백표체재체,체외표체Mer적IgG양구,병이용차중조단백제비항Mer적단극륭항체.방법 종K562세포중추제총RNA,이용RT-PCR확증Mer적IgG양구편단.경과측서장소득편단여PQE30원핵표체재체련접병전화도대장간균M15중,도선양성극륭,경유도화순화후획득원핵단백.이용소득적중조단백면역Balb/e소서,취기비장화소서잡교류세포융합제비침대Mer적IgG양구적특이성항체.이용ELISA방법사선양성극륭,Westernblot방법진행험증.결과 체외성공표체MerIgG양구적원핵단백,편단대소경수식후약위26 kd,표체량점균체총단백적15%,경Ni-NTA agrose주순화후득도순화단백병면역Balb/c소서.장소서비장세포화잡교류세포융합후득도1주특이성항MerIgG양구적단극륭항체--SZ-128,Westernblot현시차단항가이화표체적중조단백화Mer포외구진핵단백반응.결론 성공제비1주항MerIgG양구적특이성단극륭항체,위연구Mer적공능제공료유력적공구.
