中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2008年
4期
8-12
,共5页
简中友%贾赟%王全凯%徐立秋%吴斌%肇慧君%李振荣
簡中友%賈赟%王全凱%徐立鞦%吳斌%肇慧君%李振榮
간중우%가빈%왕전개%서립추%오빈%조혜군%리진영
犬瘟热病毒%N基因%潮霉素%CHO-K1细胞
犬瘟熱病毒%N基因%潮黴素%CHO-K1細胞
견온열병독%N기인%조매소%CHO-K1세포
根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDVN基因的引物.以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体.然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验(IFA)鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础.
根據GenBank髮錶的犬瘟熱病毒N基因全序列,設計閤成瞭1對特異擴增CDVN基因的引物.以山東泰安分離的CDV-FOX-TA株細胞毒中提取病毒RNA來製模闆,利用RT-PCR擴增齣瞭1.6kb的N基因,將其剋隆到pIREShyg載體上,構建瞭pIRES-N真覈錶達載體.然後通過燐痠鈣共沉澱法轉染CHO-K1細胞,通過潮黴素篩選得到暘性剋隆,間接免疫熒光實驗(IFA)鑒定N基因在CHO細胞中的錶達,併用RT-PCR方法從轉錄水平證實N基因在CHO-K1細胞中的錶達,最終建立瞭CHO/CDV-N細胞株,為犬瘟熱病毒的血清學檢測和基因疫苗的研製奠定瞭基礎.
근거GenBank발표적견온열병독N기인전서렬,설계합성료1대특이확증CDVN기인적인물.이산동태안분리적CDV-FOX-TA주세포독중제취병독RNA래제모판,이용RT-PCR확증출료1.6kb적N기인,장기극륭도pIREShyg재체상,구건료pIRES-N진핵표체재체.연후통과린산개공침정법전염CHO-K1세포,통과조매소사선득도양성극륭,간접면역형광실험(IFA)감정N기인재CHO세포중적표체,병용RT-PCR방법종전록수평증실N기인재CHO-K1세포중적표체,최종건립료CHO/CDV-N세포주,위견온열병독적혈청학검측화기인역묘적연제전정료기출.
