激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2008年
5期
684-688
,共5页
张青岩%任道全%孙斌%邱义兰%刘如石%郭向荣
張青巖%任道全%孫斌%邱義蘭%劉如石%郭嚮榮
장청암%임도전%손빈%구의란%류여석%곽향영
Rac1%Cdc42%FRET%单分子探针
Rac1%Cdc42%FRET%單分子探針
Rac1%Cdc42%FRET%단분자탐침
以PCR方法从人脑cDNA基因文库扩增Rac1、Cdc42 cDNA全序列及其效应蛋白基因Pak1、N-WASP的GTP酶联结区域(GBD)序列,从dsRed1-N1质粒扩增红色荧光蛋白dsRed1cDNA全序列.将cDNA序列依次定向克隆至pECFP-N1质粒载体,获得基于FRET原理,包含dsRed1,Pak1或N-WASP的GBD,Rac1或Cdc42,ECFP编码序列的单分子探针.在dsRed1的C末端加入一段CAAM法尼基化基序,构建包含EGFP,Pak1的GBD,Rac1或Cdc42,dsRed1-CAAM的质膜特异表达的单分子探针.采用这两种探针,可用于监测活细胞中诱导激活的Rac1、Cdc42信号转导通路的3D时空图像,检测待测蛋白分子的GEF或GAP活性.
以PCR方法從人腦cDNA基因文庫擴增Rac1、Cdc42 cDNA全序列及其效應蛋白基因Pak1、N-WASP的GTP酶聯結區域(GBD)序列,從dsRed1-N1質粒擴增紅色熒光蛋白dsRed1cDNA全序列.將cDNA序列依次定嚮剋隆至pECFP-N1質粒載體,穫得基于FRET原理,包含dsRed1,Pak1或N-WASP的GBD,Rac1或Cdc42,ECFP編碼序列的單分子探針.在dsRed1的C末耑加入一段CAAM法尼基化基序,構建包含EGFP,Pak1的GBD,Rac1或Cdc42,dsRed1-CAAM的質膜特異錶達的單分子探針.採用這兩種探針,可用于鑑測活細胞中誘導激活的Rac1、Cdc42信號轉導通路的3D時空圖像,檢測待測蛋白分子的GEF或GAP活性.
이PCR방법종인뇌cDNA기인문고확증Rac1、Cdc42 cDNA전서렬급기효응단백기인Pak1、N-WASP적GTP매련결구역(GBD)서렬,종dsRed1-N1질립확증홍색형광단백dsRed1cDNA전서렬.장cDNA서렬의차정향극륭지pECFP-N1질립재체,획득기우FRET원리,포함dsRed1,Pak1혹N-WASP적GBD,Rac1혹Cdc42,ECFP편마서렬적단분자탐침.재dsRed1적C말단가입일단CAAM법니기화기서,구건포함EGFP,Pak1적GBD,Rac1혹Cdc42,dsRed1-CAAM적질막특이표체적단분자탐침.채용저량충탐침,가용우감측활세포중유도격활적Rac1、Cdc42신호전도통로적3D시공도상,검측대측단백분자적GEF혹GAP활성.
