中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
10期
848-851
,共4页
曹传平%陈晓虹%吴建国%商阿丽%虞慧华%康五朋%郑玲莉%张敬%鞠佃文
曹傳平%陳曉虹%吳建國%商阿麗%虞慧華%康五朋%鄭玲莉%張敬%鞠佃文
조전평%진효홍%오건국%상아려%우혜화%강오붕%정령리%장경%국전문
人胰岛素样生长因子-1%原核表达%纯化%生物学活性
人胰島素樣生長因子-1%原覈錶達%純化%生物學活性
인이도소양생장인자-1%원핵표체%순화%생물학활성
目的 构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性.方法 以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆人pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆人表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.MTT法检测rhlGF-1促MCF-7细胞的增殖作用.结果 转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7 700的目的 蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%.Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用.结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1.
目的 構建人胰島素樣生長因子-1(hIGF-1)基因原覈錶達載體,併檢測錶達的重組人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物學活性.方法 以pUC57-hIGF-1質粒為模闆,PCR擴增hIGF-1基因,剋隆人pTEtrans載體,進行DNA序列分析後,亞剋隆人錶達載體pTE,轉化大腸桿菌W3110,進行誘導錶達,錶達產物經暘離子交換層析和凝膠過濾層析純化,併進行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.MTT法檢測rhlGF-1促MCF-7細胞的增殖作用.結果 轉化質粒pTE-hIGF-1的大腸桿菌經誘導後,以可溶性形式錶達相對分子質量約為7 700的目的 蛋白,錶達量約佔菌體總蛋白的8%.Western blot證實該蛋白具有良好的反應原性,Tricine-SDS-PAGE證實純度達98%以上,MTT證實具有良好的促MCF-7細胞增殖的作用.結論已成功構建瞭含hIGF-1基因的原覈錶達載體,併穫得具有生物學活性的高純度rhIGF-1.
목적 구건인이도소양생장인자-1(hIGF-1)기인원핵표체재체,병검측표체적중조인IGF-1(rhIGF-1)단백적생물학활성.방법 이pUC57-hIGF-1질립위모판,PCR확증hIGF-1기인,극륭인pTEtrans재체,진행DNA서렬분석후,아극륭인표체재체pTE,전화대장간균W3110,진행유도표체,표체산물경양리자교환층석화응효과려층석순화,병진행Tricine-SDS-PAGE화Western blot분석.MTT법검측rhlGF-1촉MCF-7세포적증식작용.결과 전화질립pTE-hIGF-1적대장간균경유도후,이가용성형식표체상대분자질량약위7 700적목적 단백,표체량약점균체총단백적8%.Western blot증실해단백구유량호적반응원성,Tricine-SDS-PAGE증실순도체98%이상,MTT증실구유량호적촉MCF-7세포증식적작용.결론이성공구건료함hIGF-1기인적원핵표체재체,병획득구유생물학활성적고순도rhIGF-1.
