CAJ | 학술논문

目的:利用逆转录病毒介导的shRNA稳定沉默NF kappa B p65基因,观察沉默NF kappa B p65对HT29细胞药物敏感性的影响.方法:设计并合成针对p65基因的shRNA序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT 29;G418筛选阳性细胞,局部消化法挑选单克隆;Western blot检测蛋白表达水平;于裸鼠皮下接种细胞形成种植瘤.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被HindⅢ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800 bp片段.测序结果显示,针对NF kappa B p65基因的shRNA序列成功插入逆转录病毒质粒.转染逆转录病毒载体的HT 29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blot结果显示逆转录病毒介导的shRNA有效沉默NF kappa B p65基因.经化疗后,沉默NF kappa B p65基因HT 29组的裸鼠种植瘤显著性低于HT 29组.结论:逆转录病毒介导的shRNA能高效、特异、稳定沉默NF kappa B p65基因.提高结肠癌裸鼠种植瘤对奥沙利铂的药物敏感性.
목적:이용역전록병독개도적shRNA은정침묵NF kappa B p65기인,관찰침묵NF kappa B p65대HT29세포약물민감성적영향.방법:설계병합성침대p65기인적shRNA서렬,구건역전록병독질립;지질체전염역전록병독질립지결장암세포주HT 29;G418사선양성세포,국부소화법도선단극륭;Western blot검측단백표체수평;우라서피하접충세포형성충식류.결과:경지당응효전영결과현시,구건성공적역전록병독재체피HindⅢ한제성내절매절위량개분별장1950bp여5800 bp편단.측서결과현시,침대NF kappa B p65기인적shRNA서렬성공삽입역전록병독질립.전염역전록병독재체적HT 29세포지속표체록색형광단백,병대G418구항성;Western blot결과현시역전록병독개도적shRNA유효침묵NF kappa B p65기인.경화료후,침묵NF kappa B p65기인HT 29조적라서충식류현저성저우HT 29조.결론:역전록병독개도적shRNA능고효、특이、은정침묵NF kappa B p65기인.제고결장암라서충식류대오사리박적약물민감성.