组织工程与重建外科杂志
組織工程與重建外科雜誌
조직공정여중건외과잡지
JOURNAL OF TISSUE ENGINEERING AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2011年
5期
244-247,253
,共5页
聚酰胺-胺型树状聚合物%成纤维细胞%转染%基因治疗
聚酰胺-胺型樹狀聚閤物%成纖維細胞%轉染%基因治療
취선알-알형수상취합물%성섬유세포%전염%기인치료
目的 探讨聚酰胺-胺型树状聚合物(PAMAM)作为基因载体,体外转染成纤维细胞的可行性.方法 ①将pEGFP与PAMAM按不同电荷比混合,通过原子力显微镜(AFM)对PAMAM和PAMAM-pEGFP复合物进行粒径、形态的表征；凝胶电泳实验和Zeta电位实验检验PAMAM与pEGFP质粒在不同电荷比时形成复合物的能力;通过DNA共沉淀试验检测不同电荷比下PAMAM对质粒pEGFP的包封率.②将不同电荷比的PAMAM-pEGFP复合物转染至小鼠胚胎成纤维细胞系,48 h后荧光显微镜下观察转染情况.③CCK-8实验检测转染后细胞的增殖活性.结果 PAMAMpDNA复合物的粒径约10 nm.PAMAM在电荷比大于2时就能有效包裹质粒.随电荷比的增加,复合物的Zeta电位增加,在溶液中的稳定性和分散性也提高.包封率在电荷比为4∶1时达95％.转染效率随电荷比的增加呈增高趋势,其中在4∶1和6∶1时转染效率达到最高.细胞毒性与电荷比有关,电荷比大于6∶1时,PAMAM对细胞生长有毒性作用.结论 PAMAM纳米载体可安全有效地介导基因转染,是一种理想的基因递送系统.
目的 探討聚酰胺-胺型樹狀聚閤物(PAMAM)作為基因載體,體外轉染成纖維細胞的可行性.方法 ①將pEGFP與PAMAM按不同電荷比混閤,通過原子力顯微鏡(AFM)對PAMAM和PAMAM-pEGFP複閤物進行粒徑、形態的錶徵；凝膠電泳實驗和Zeta電位實驗檢驗PAMAM與pEGFP質粒在不同電荷比時形成複閤物的能力;通過DNA共沉澱試驗檢測不同電荷比下PAMAM對質粒pEGFP的包封率.②將不同電荷比的PAMAM-pEGFP複閤物轉染至小鼠胚胎成纖維細胞繫,48 h後熒光顯微鏡下觀察轉染情況.③CCK-8實驗檢測轉染後細胞的增殖活性.結果 PAMAMpDNA複閤物的粒徑約10 nm.PAMAM在電荷比大于2時就能有效包裹質粒.隨電荷比的增加,複閤物的Zeta電位增加,在溶液中的穩定性和分散性也提高.包封率在電荷比為4∶1時達95％.轉染效率隨電荷比的增加呈增高趨勢,其中在4∶1和6∶1時轉染效率達到最高.細胞毒性與電荷比有關,電荷比大于6∶1時,PAMAM對細胞生長有毒性作用.結論 PAMAM納米載體可安全有效地介導基因轉染,是一種理想的基因遞送繫統.
목적 탐토취선알-알형수상취합물(PAMAM)작위기인재체,체외전염성섬유세포적가행성.방법 ①장pEGFP여PAMAM안불동전하비혼합,통과원자력현미경(AFM)대PAMAM화PAMAM-pEGFP복합물진행립경、형태적표정；응효전영실험화Zeta전위실험검험PAMAM여pEGFP질립재불동전하비시형성복합물적능력;통과DNA공침정시험검측불동전하비하PAMAM대질립pEGFP적포봉솔.②장불동전하비적PAMAM-pEGFP복합물전염지소서배태성섬유세포계,48 h후형광현미경하관찰전염정황.③CCK-8실험검측전염후세포적증식활성.결과 PAMAMpDNA복합물적립경약10 nm.PAMAM재전하비대우2시취능유효포과질립.수전하비적증가,복합물적Zeta전위증가,재용액중적은정성화분산성야제고.포봉솔재전하비위4∶1시체95％.전염효솔수전하비적증가정증고추세,기중재4∶1화6∶1시전염효솔체도최고.세포독성여전하비유관,전하비대우6∶1시,PAMAM대세포생장유독성작용.결론 PAMAM납미재체가안전유효지개도기인전염,시일충이상적기인체송계통.
