解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
4期
479-483
,共5页
周吉航%周世权%王晔恺%曾芳%马利娜%刘晓光
週吉航%週世權%王曄愷%曾芳%馬利娜%劉曉光
주길항%주세권%왕엽개%증방%마리나%류효광
外周血%免疫球蛋白%轻链%可变区%反转录聚合酶链式反应%兔
外週血%免疫毬蛋白%輕鏈%可變區%反轉錄聚閤酶鏈式反應%兔
외주혈%면역구단백%경련%가변구%반전록취합매련식반응%토
目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列.方法 首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型.结果 共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列.没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5'端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03.33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次).18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次).Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异.结论 利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因.
目的 從兔外週血總RNA中直接擴增齣B細胞κ輕鏈的可變區序列.方法 首先從IMGT/GENE-DB數據庫中穫取大耳白兔Ig胚繫基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、設計引物,然後以非免疫兔外週血總RNA為模闆進行RT-PCR擴增,迴收產物併剋隆到T載體,隨機挑選單剋隆測序,最終將序列提交到IMGT/V-QUEST,分析齣每箇剋隆的Vκ-Jκ組閤,併利用BioEdit的本地Blast程序比較齣Cκ的基因型.結果 共設計齣4對引物,其中引物對RK.C1[4-5-9]無產物,引物對RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有產物,分彆迴收、剋隆到T載體後各挑取20箇剋隆,共穫得51箇剋隆的插入子序列.沒有任何2箇剋隆的插入子序列完全相同,每箇剋隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5'耑序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1組閤的剋隆33箇,Vκ-Jκ-IGKC2組閤的剋隆18箇;68箇Vκ胚繫基因中有22箇齣現,其中頻率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其餘均為3次以下;8箇Jκ胚繫基因中隻有1箇齣現,為IGKJ1-2*01;2箇Cκ基因的等位基因分彆為IGKC1*01和IGKC2*03.33箇Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]剋隆中有17種不同的組閤方式,其中頻率最高的為[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次).18箇Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]剋隆中有11種不同的組閤方式,頻率最高的為[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次).Vκ-Jκ-Cκ組閤方式相同的剋隆,序列仍具有明顯的差異.結論 利用自行設計的兼併引物,成功併特異地從兔外週血總RNA中直接擴增齣瞭κ輕鏈的可變區,且產物具有良好的多樣性,但所有Vκ-Jκ-Cκ組閤中隻齣現瞭1種Jκ基因.
목적 종토외주혈총RNA중직접확증출B세포κ경련적가변구서렬.방법 수선종IMGT/GENE-DB수거고중획취대이백토Ig배계기인Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)화Cκ(IGKC)적cDNA서렬、설계인물,연후이비면역토외주혈총RNA위모판진행RT-PCR확증,회수산물병극륭도T재체,수궤도선단극륭측서,최종장서렬제교도IMGT/V-QUEST,분석출매개극륭적Vκ-Jκ조합,병이용BioEdit적본지Blast정서비교출Cκ적기인형.결과 공설계출4대인물,기중인물대RK.C1[4-5-9]무산물,인물대RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]화RK.C2[1-2-3-4]유산물,분별회수、극륭도T재체후각도취20개극륭,공획득51개극륭적삽입자서렬.몰유임하2개극륭적삽입자서렬완전상동,매개극륭균포함완정적토Vκ、Jκ급Cκ적5'단서렬,기중Vκ-Jκ-IGKC1조합적극륭33개,Vκ-Jκ-IGKC2조합적극륭18개;68개Vκ배계기인중유22개출현,기중빈솔최고적시IGKV1S10*01(12차),기차시IGKV1S36*01、IGKV1S37*01화IGKV1S4*01(각5차),기여균위3차이하;8개Jκ배계기인중지유1개출현,위IGKJ1-2*01;2개Cκ기인적등위기인분별위IGKC1*01화IGKC2*03.33개Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]극륭중유17충불동적조합방식,기중빈솔최고적위[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7차).18개Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]극륭중유11충불동적조합방식,빈솔최고적위[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5차).Vκ-Jκ-Cκ조합방식상동적극륭,서렬잉구유명현적차이.결론 이용자행설계적겸병인물,성공병특이지종토외주혈총RNA중직접확증출료κ경련적가변구,차산물구유량호적다양성,단소유Vκ-Jκ-Cκ조합중지출현료1충Jκ기인.