CAJ | 학술논문

目的:利用基因工程技术原核表达并纯化结核分枝杆菌α晶体蛋白(Acr).方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增Acr的编码基因,以pCold为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析和纯化该表达产物.结果:构建了具有正确基因序列的Acr重组表达质粒,重组Acr在大肠杆菌BL21(DE3)中经低温诱导得到可溶性表达；分别用6×His的单克隆抗体和16-kDa单克隆抗体对表达产物进行Western印迹分析,结果显示在相对分子质量约19000处均有特异性条带,与预计大小吻合；纯化后蛋白纯度达90％,浓度达0.8 mg/mL.结论:表达了重组可溶性Acr,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.
목적:이용기인공정기술원핵표체병순화결핵분지간균α정체단백(Acr).방법:이결핵분지간균H37Rv주기인조DNA위모판,통과PCR방법확증Acr적편마기인,이pCold위재체구건중조질립,재전화도표체숙주균대장간균BL21(DE3)중,용IPTG유도표체,경SDS-PAGE화Western인적분석화순화해표체산물.결과:구건료구유정학기인서렬적Acr중조표체질립,중조Acr재대장간균BL21(DE3)중경저온유도득도가용성표체；분별용6×His적단극륭항체화16-kDa단극륭항체대표체산물진행Western인적분석,결과현시재상대분자질량약19000처균유특이성조대,여예계대소문합；순화후단백순도체90％,농도체0.8 mg/mL.결론:표체료중조가용성Acr,위심입연구해단백적생물학、면역학활성전정료기출.