中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
6期
481-484,493
,共5页
王佐周%刘丽波%薛一雪%刘云会
王佐週%劉麗波%薛一雪%劉雲會
왕좌주%류려파%설일설%류운회
内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ%occludin%ZO-1%蛋白激酶C%血肿瘤屏障
內皮-單覈細胞激活多肽Ⅱ%occludin%ZO-1%蛋白激酶C%血腫瘤屏障
내피-단핵세포격활다태Ⅱ%occludin%ZO-1%단백격매C%혈종류병장
目的 研究内皮一单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)对血肿瘤屏障(BTB)紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用.方法 提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ0.5 h组、EMAP-Ⅱ1h组、EMAP-Ⅱ2h组、EMAP-Ⅱ3h组、EMAP-Ⅱ6h组和EMAP-Ⅱ12h组.应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性.结果 与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的踌内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用1h时效果最显著(P＜0.01);同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用1h时达峰值(P＜0.01).结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一.
目的 研究內皮一單覈細胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)對血腫瘤屏障(BTB)緊密連接相關蛋白occludin和ZO-1分佈和相互作用的影響,以及蛋白激酶C(PKC)活性的變化,探討PKC在EMAP-Ⅱ開放緊密連接中的作用.方法 提取和培養大鼠腦微血管內皮細胞,建立體外BTB模型;實驗分為7組,即模型組、EMAP-Ⅱ0.5 h組、EMAP-Ⅱ1h組、EMAP-Ⅱ2h組、EMAP-Ⅱ3h組、EMAP-Ⅱ6h組和EMAP-Ⅱ12h組.應用Milicell-ERS繫統檢測體外BTB模型跨內皮細胞阻抗值的變化;雙重免疫熒光檢測內皮細胞中緊密連接相關蛋白occludin和ZO-1的分佈和定位;免疫共沉澱檢測內皮細胞中occludin和ZO-1的結閤水平;PKC活性檢測試劑盒檢測體外BTB模型內皮細胞中總PKC的活性.結果 與模型組相比,EMAP-Ⅱ顯著降低瞭體外BTB模型的躊內皮細胞阻抗值,增加瞭BTB通透性;在模型組,緊密連接相關蛋白occludin和ZO-1在內皮細胞邊緣呈連續分佈,併且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能夠使occludin和ZO-1在內皮細胞邊緣的分佈減少,二者的共定位減弱;免疫共沉澱結果也顯示EMAP-Ⅱ能夠減弱occludin和ZO-1的結閤;上述作用在EMAP-Ⅱ作用1h時效果最顯著(P＜0.01);同時髮現EMAP-Ⅱ作用後,BTB模型內皮細胞中PKC的活性顯著升高,在EMAP-Ⅱ作用1h時達峰值(P＜0.01).結論 EMAP-Ⅱ能夠調節緊密連接相關蛋白occludin和ZO-1在內皮細胞的相互作用,開放緊密連接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影響occludin和ZO-1相互作用、調節緊密連接的機製之一.
목적 연구내피일단핵세포격활다태Ⅱ(EMAP-Ⅱ)대혈종류병장(BTB)긴밀련접상관단백occludin화ZO-1분포화상호작용적영향,이급단백격매C(PKC)활성적변화,탐토PKC재EMAP-Ⅱ개방긴밀련접중적작용.방법 제취화배양대서뇌미혈관내피세포,건입체외BTB모형;실험분위7조,즉모형조、EMAP-Ⅱ0.5 h조、EMAP-Ⅱ1h조、EMAP-Ⅱ2h조、EMAP-Ⅱ3h조、EMAP-Ⅱ6h조화EMAP-Ⅱ12h조.응용Milicell-ERS계통검측체외BTB모형과내피세포조항치적변화;쌍중면역형광검측내피세포중긴밀련접상관단백occludin화ZO-1적분포화정위;면역공침정검측내피세포중occludin화ZO-1적결합수평;PKC활성검측시제합검측체외BTB모형내피세포중총PKC적활성.결과 여모형조상비,EMAP-Ⅱ현저강저료체외BTB모형적주내피세포조항치,증가료BTB통투성;재모형조,긴밀련접상관단백occludin화ZO-1재내피세포변연정련속분포,병차이자존재공정위,EMAP-Ⅱ능구사occludin화ZO-1재내피세포변연적분포감소,이자적공정위감약;면역공침정결과야현시EMAP-Ⅱ능구감약occludin화ZO-1적결합;상술작용재EMAP-Ⅱ작용1h시효과최현저(P＜0.01);동시발현EMAP-Ⅱ작용후,BTB모형내피세포중PKC적활성현저승고,재EMAP-Ⅱ작용1h시체봉치(P＜0.01).결론 EMAP-Ⅱ능구조절긴밀련접상관단백occludin화ZO-1재내피세포적상호작용,개방긴밀련접;PKC가능시EMAP-Ⅱ영향occludin화ZO-1상호작용、조절긴밀련접적궤제지일.
