CAJ | 학술논문

目的建立一种体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)定向发育为CD+34/ Sca-1+造血干细胞(hematopoietic stem cell, HSC)的实验方法.方法联合应用血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、白细胞介素3(interleukin 3,IL-3)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)和促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)分阶段首先诱导ESC形成富含CD+34/ Sca-1+细胞的胚胎体(embryoid body,EB),然后分别观察EB细胞在甲基纤维素半固体培养体系和骨髓基质细胞饲养层培养体系中进一步分化为HSC的情况.结果VEGF联合其他细胞因子能有效促进EB中HSC的形成,CD+34/ Sca-1+细胞数高达(13.72±1.92)%.收获此阶段的EB进一步诱导发现,甲基纤维素培养体系造血克隆形成率明显低于骨髓基质细胞培养体系,在甲基纤维素中CD+34/ Sca-1+细胞数最高只能达到(20.52±2.78)%,而基质细胞中CD+34/ Sca-1+细胞数可达(34.60±3.71)%(t＝5.26,P<0.001)以上,且来自骨髓基质细胞培养体系的造血分化细胞在造血集落培养时能形成类型和数量更多的造血克隆.结论使用VEGF联合SCF、IL-3、IL-6、EPO分阶段诱导ESC形成富含CD+34/ Sca-1+细胞的EB,并进一步在骨髓基质细胞培养体系中扩增,是体外诱导ESC发育为HSC的较好方法.
목적건립일충체외유도배태간세포(embryonic stem cell, ESC)정향발육위CD+34/ Sca-1+조혈간세포(hematopoietic stem cell, HSC)적실험방법.방법연합응용혈관내피생장인자(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、간세포인자(stem cell factor,SCF)、백세포개소3(interleukin 3,IL-3)、백세포개소6(interleukin 6,IL-6)화촉홍세포생성소(erythropoietin, EPO)분계단수선유도ESC형성부함CD+34/ Sca-1+세포적배태체(embryoid body,EB),연후분별관찰EB세포재갑기섬유소반고체배양체계화골수기질세포사양층배양체계중진일보분화위HSC적정황.결과VEGF연합기타세포인자능유효촉진EB중HSC적형성,CD+34/ Sca-1+세포수고체(13.72±1.92)%.수획차계단적EB진일보유도발현,갑기섬유소배양체계조혈극륭형성솔명현저우골수기질세포배양체계,재갑기섬유소중CD+34/ Sca-1+세포수최고지능체도(20.52±2.78)%,이기질세포중CD+34/ Sca-1+세포수가체(34.60±3.71)%(t＝5.26,P<0.001)이상,차래자골수기질세포배양체계적조혈분화세포재조혈집락배양시능형성류형화수량경다적조혈극륭.결론사용VEGF연합SCF、IL-3、IL-6、EPO분계단유도ESC형성부함CD+34/ Sca-1+세포적EB,병진일보재골수기질세포배양체계중확증,시체외유도ESC발육위HSC적교호방법.