中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2004年
6期
365-368
,共4页
易学瑞%孟凌华%邵光%袁有成%李斌%杨联萍%孔祥平
易學瑞%孟凌華%邵光%袁有成%李斌%楊聯萍%孔祥平
역학서%맹릉화%소광%원유성%리빈%양련평%공상평
CD40L%包涵体%亲和层析%SP2/O细胞
CD40L%包涵體%親和層析%SP2/O細胞
CD40L%포함체%친화층석%SP2/O세포
目的表达相对分子质量18 000的截断型人可溶性CD40L.方法针对人CD40L(Glu108-Leu261)设计引物,以全长人CD40L为模板,扩增目的基因,经pGEM-T中间载体进一步连接到pQE-40载体,构建pQE/sCD40L表达载体.转化E.coliM15后经IPTG诱导表达,分离、洗涤包涵体,并利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,经复性后检测对骨髓瘤细胞SP2/0细胞株的抑制作用.结果克隆的目的基因为480bp,经测序与文献报道一致,所构建的菌株(M15/PQE/sCD40L)经诱导表达目的蛋白量为26.7%,相对分子质量为18 000,纯化后蛋白纯度为96.5%,对SP2/0细胞有生长抑制作用.结论原核表达的截断型人可溶性CD40L具有抑制肿瘤细胞生长作用.
目的錶達相對分子質量18 000的截斷型人可溶性CD40L.方法針對人CD40L(Glu108-Leu261)設計引物,以全長人CD40L為模闆,擴增目的基因,經pGEM-T中間載體進一步連接到pQE-40載體,構建pQE/sCD40L錶達載體.轉化E.coliM15後經IPTG誘導錶達,分離、洗滌包涵體,併利用Ni-NTA親和層析純化目的蛋白,經複性後檢測對骨髓瘤細胞SP2/0細胞株的抑製作用.結果剋隆的目的基因為480bp,經測序與文獻報道一緻,所構建的菌株(M15/PQE/sCD40L)經誘導錶達目的蛋白量為26.7%,相對分子質量為18 000,純化後蛋白純度為96.5%,對SP2/0細胞有生長抑製作用.結論原覈錶達的截斷型人可溶性CD40L具有抑製腫瘤細胞生長作用.
목적표체상대분자질량18 000적절단형인가용성CD40L.방법침대인CD40L(Glu108-Leu261)설계인물,이전장인CD40L위모판,확증목적기인,경pGEM-T중간재체진일보련접도pQE-40재체,구건pQE/sCD40L표체재체.전화E.coliM15후경IPTG유도표체,분리、세조포함체,병이용Ni-NTA친화층석순화목적단백,경복성후검측대골수류세포SP2/0세포주적억제작용.결과극륭적목적기인위480bp,경측서여문헌보도일치,소구건적균주(M15/PQE/sCD40L)경유도표체목적단백량위26.7%,상대분자질량위18 000,순화후단백순도위96.5%,대SP2/0세포유생장억제작용.결론원핵표체적절단형인가용성CD40L구유억제종류세포생장작용.
