生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
226-231
,共6页
贺笋%石星明%王云峰%王玫%冉多良%童光志
賀筍%石星明%王雲峰%王玫%冉多良%童光誌
하순%석성명%왕운봉%왕매%염다량%동광지
NDV%DNA%疫苗%密码子优化%信号肽%间接免疫荧光%免疫印迹
NDV%DNA%疫苗%密碼子優化%信號肽%間接免疫熒光%免疫印跡
NDV%DNA%역묘%밀마자우화%신호태%간접면역형광%면역인적
DNA 疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对NDV F48E9 株的 HN 基因进行了修饰,对修饰前后HN基因表达水平进行了比较.利用分子生物学软件将 NDV F48E9 株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子,同时在HN基因的5'端加上同样已替换密码子的禽流感病毒 HA蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达.修饰后HN基因命名为 SoptiHN,剔除信号肽的 HN 基因命名为optiHN. 将 SoptiHN、optiHN 和 F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体 pVAX1 和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列 CpG-ODN 的载体 pVAX1-CpG 中,将他们分别命名为 pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN 和pV-HN、pVC-HN,用这些质粒转染 293T 细胞,48小时后间接免疫荧光和 Western blotting 检测细胞中瞬时表达的 HN蛋白.结果显示,与未经修饰的HN基因相比,修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高,并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量.
DNA 疫苗的免疫效果與抗原基因的錶達量和免疫原性有直接關繫,為瞭提高目的基因的錶達量,本研究對NDV F48E9 株的 HN 基因進行瞭脩飾,對脩飾前後HN基因錶達水平進行瞭比較.利用分子生物學軟件將 NDV F48E9 株的HN基因的密碼子全部替換為鷄體內偏嗜性密碼子,同時在HN基因的5'耑加上同樣已替換密碼子的禽流感病毒 HA蛋白信號肽序列以期望提高目的蛋白在細胞中的錶達.脩飾後HN基因命名為 SoptiHN,剔除信號肽的 HN 基因命名為optiHN. 將 SoptiHN、optiHN 和 F48E9株的HN基因分彆剋隆到真覈錶達載體 pVAX1 和含有多箇鷄體內最適免疫刺激序列 CpG-ODN 的載體 pVAX1-CpG 中,將他們分彆命名為 pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN 和pV-HN、pVC-HN,用這些質粒轉染 293T 細胞,48小時後間接免疫熒光和 Western blotting 檢測細胞中瞬時錶達的 HN蛋白.結果顯示,與未經脩飾的HN基因相比,脩飾後的HN基因體外瞬時錶達水平明顯提高,併且密碼子優化與添加信號肽序列這兩種途徑都可以提高HN基因的體外錶達量.
DNA 역묘적면역효과여항원기인적표체량화면역원성유직접관계,위료제고목적기인적표체량,본연구대NDV F48E9 주적 HN 기인진행료수식,대수식전후HN기인표체수평진행료비교.이용분자생물학연건장 NDV F48E9 주적HN기인적밀마자전부체환위계체내편기성밀마자,동시재HN기인적5'단가상동양이체환밀마자적금류감병독 HA단백신호태서렬이기망제고목적단백재세포중적표체.수식후HN기인명명위 SoptiHN,척제신호태적 HN 기인명명위optiHN. 장 SoptiHN、optiHN 화 F48E9주적HN기인분별극륭도진핵표체재체 pVAX1 화함유다개계체내최괄면역자격서렬 CpG-ODN 적재체 pVAX1-CpG 중,장타문분별명명위 pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN 화pV-HN、pVC-HN,용저사질립전염 293T 세포,48소시후간접면역형광화 Western blotting 검측세포중순시표체적 HN단백.결과현시,여미경수식적HN기인상비,수식후적HN기인체외순시표체수평명현제고,병차밀마자우화여첨가신호태서렬저량충도경도가이제고HN기인적체외표체량.
