华西医学
華西醫學
화서의학
WEST CHINA MEDICAL JOURNAL
2008年
4期
701-703
,共3页
曹永宽%莫永炎%薛刚%王培红%姜勇%田伏洲
曹永寬%莫永炎%薛剛%王培紅%薑勇%田伏洲
조영관%막영염%설강%왕배홍%강용%전복주
人%AWP1%红色荧光蛋白%GST-beads%大肠杆菌
人%AWP1%紅色熒光蛋白%GST-beads%大腸桿菌
인%AWP1%홍색형광단백%GST-beads%대장간균
目的:建立红RFP-AWP1融合基因的原核表达载体,研究其表达蛋白特性.方法:将克隆的人AWP1 (associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)和水母的红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)的cDNA插入到原核表达载体pET-17b的多克隆位点(mutiple clone sites,MCS)中,经AWP1 cDNA的PCR鉴定和E.coli DE3中的表达鉴定后,E.coli DE3表达AWP1-RFP融合蛋白,荧光显微镜观察其表达特性及与GST-beads的pull-down实验.结果:成功构建了载体pET-AWP1-DsRed1,在大肠杆菌中获得了高效表达的AWP1-RFP融合蛋白 ,其活菌液在荧光显微镜下呈火山熔岩状的亮红色,干固的细菌呈斑片状红色荧光;AWP1-RFP融合蛋白可与GST-beads结合,并在激发波长为508 nm的条件下呈红色荧光,而在波长为488 nm激发光条件下可见橙黄色荧光.结论:在体外验证了AWP1-RFP融合蛋白具有可视性表达的特点,同时发现其能与GST-beads结合,为pull-down AWP1及其相关蛋白提供了一条新途径,为研究AWP1-RFP融合蛋白在真核细胞中的表达、定位及蛋白-蛋白相互作用等具有指导意义.
目的:建立紅RFP-AWP1融閤基因的原覈錶達載體,研究其錶達蛋白特性.方法:將剋隆的人AWP1 (associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)和水母的紅色熒光蛋白(red fluorescence protein,RFP)的cDNA插入到原覈錶達載體pET-17b的多剋隆位點(mutiple clone sites,MCS)中,經AWP1 cDNA的PCR鑒定和E.coli DE3中的錶達鑒定後,E.coli DE3錶達AWP1-RFP融閤蛋白,熒光顯微鏡觀察其錶達特性及與GST-beads的pull-down實驗.結果:成功構建瞭載體pET-AWP1-DsRed1,在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達的AWP1-RFP融閤蛋白 ,其活菌液在熒光顯微鏡下呈火山鎔巖狀的亮紅色,榦固的細菌呈斑片狀紅色熒光;AWP1-RFP融閤蛋白可與GST-beads結閤,併在激髮波長為508 nm的條件下呈紅色熒光,而在波長為488 nm激髮光條件下可見橙黃色熒光.結論:在體外驗證瞭AWP1-RFP融閤蛋白具有可視性錶達的特點,同時髮現其能與GST-beads結閤,為pull-down AWP1及其相關蛋白提供瞭一條新途徑,為研究AWP1-RFP融閤蛋白在真覈細胞中的錶達、定位及蛋白-蛋白相互作用等具有指導意義.
목적:건립홍RFP-AWP1융합기인적원핵표체재체,연구기표체단백특성.방법:장극륭적인AWP1 (associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)화수모적홍색형광단백(red fluorescence protein,RFP)적cDNA삽입도원핵표체재체pET-17b적다극륭위점(mutiple clone sites,MCS)중,경AWP1 cDNA적PCR감정화E.coli DE3중적표체감정후,E.coli DE3표체AWP1-RFP융합단백,형광현미경관찰기표체특성급여GST-beads적pull-down실험.결과:성공구건료재체pET-AWP1-DsRed1,재대장간균중획득료고효표체적AWP1-RFP융합단백 ,기활균액재형광현미경하정화산용암상적량홍색,간고적세균정반편상홍색형광;AWP1-RFP융합단백가여GST-beads결합,병재격발파장위508 nm적조건하정홍색형광,이재파장위488 nm격발광조건하가견등황색형광.결론:재체외험증료AWP1-RFP융합단백구유가시성표체적특점,동시발현기능여GST-beads결합,위pull-down AWP1급기상관단백제공료일조신도경,위연구AWP1-RFP융합단백재진핵세포중적표체、정위급단백-단백상호작용등구유지도의의.
