中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2009年
5期
414-417
,共4页
肺炎支原体%ORF6区%基因%克隆%表达
肺炎支原體%ORF6區%基因%剋隆%錶達
폐염지원체%ORF6구%기인%극륭%표체
目的 表达肺炎支原体ORF6区基因,探索其作为诊断抗原的可能性.方法 采用PCR方法 ,从肺炎支原体FH株基因组中扩增ORF6区基因,用TA克隆的方法 克隆该片断,并以该重组质粒为模板,扩增ORF6区基因,此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pET -32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE和Western-blotting检测重组质粒目的 蛋白的表达结果 .结果 获得肺炎支原体ORF6区基因长为1 003bp的DNA片段,SDS-PAGE 检测表达产物,在相对分子量56.8kDa处有阳性表达条带.免疫印迹显示,该蛋白带能与肺炎支原体阳性血清反应.结论 ORF6区基因在大肠杆菌中获得高效表达,重组蛋白具有免疫反应性.
目的 錶達肺炎支原體ORF6區基因,探索其作為診斷抗原的可能性.方法 採用PCR方法 ,從肺炎支原體FH株基因組中擴增ORF6區基因,用TA剋隆的方法 剋隆該片斷,併以該重組質粒為模闆,擴增ORF6區基因,此擴增產物經過雙酶切後剋隆到錶達載體pET -32a(+)中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達後採用SDS-PAGE和Western-blotting檢測重組質粒目的 蛋白的錶達結果 .結果 穫得肺炎支原體ORF6區基因長為1 003bp的DNA片段,SDS-PAGE 檢測錶達產物,在相對分子量56.8kDa處有暘性錶達條帶.免疫印跡顯示,該蛋白帶能與肺炎支原體暘性血清反應.結論 ORF6區基因在大腸桿菌中穫得高效錶達,重組蛋白具有免疫反應性.
목적 표체폐염지원체ORF6구기인,탐색기작위진단항원적가능성.방법 채용PCR방법 ,종폐염지원체FH주기인조중확증ORF6구기인,용TA극륭적방법 극륭해편단,병이해중조질립위모판,확증ORF6구기인,차확증산물경과쌍매절후극륭도표체재체pET -32a(+)중,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체후채용SDS-PAGE화Western-blotting검측중조질립목적 단백적표체결과 .결과 획득폐염지원체ORF6구기인장위1 003bp적DNA편단,SDS-PAGE 검측표체산물,재상대분자량56.8kDa처유양성표체조대.면역인적현시,해단백대능여폐염지원체양성혈청반응.결론 ORF6구기인재대장간균중획득고효표체,중조단백구유면역반응성.
