弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化
궁형충표면항원SAG1절단형편단재대장간균중적가용성표체급순화
Expression and Purification of Soluble Fusion Protein of Toxoplasma gondii Tsag1 in Escherichia coli
  • 万方数据
    生物技术通报 생물기술통보
    BIOTECHNOLOGY BULLETIN
    2009年 10期 136-141 ,共6页

    安立刚%蒋蔚%王权%陈永军%龚国华%周锦萍%邢小勇%孙泉云%丁铲

    안립강%장위%왕권%진영군%공국화%주금평%형소용%손천운%정산

    弓形虫%tSAG1%蛋白表达%蛋白纯化%免疫印迹%ELISA 弓形蟲%tSAG1%蛋白錶達%蛋白純化%免疫印跡%ELISA
    궁형충%tSAG1%단백표체%단백순화%면역인적%ELISA
    在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础.构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白.SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用His·Bind(R) Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性.在IPTG为1 mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在.在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达.Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别.tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂.
    재대장간균중고효표체급순화획득가용성、유반응활성적궁형충표면항원SAG1절단형편단(tSAG1),위연제신형적궁형충병검측시제전정기출.구건중조질립pET-32a-tSAG1병장기전화대장애희균BL21(DE3)표체균주,재이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도하표체단백.SDS-PAGE분석표체산물적표체형식,통과강저배양온도、강저요상전수화승고LB액체배양기pH,유도목적단백재상청중표체,이용His·Bind(R) Kit시제합대목적단백진행순화,Western blot화ELISA검측순화단백적반응원성.재IPTG위1 mmol/L、온도37℃조건하,tSAG1이융합단백(His-tSAG1)적형식재대장애희균중고효표체,표체산물이포함체형식존재.재22℃화LB배양기pH위7.7조건하,융합단백주요재상청중표체.Western blot화ELISA분석순화단백능피궁형충적양성혈청소식별.tSAG1재대장애희균중득도료가용성단백표체,경순화후능피궁형충적양성혈청소식별,가용우제비검측궁형충병적진단시제.
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