CAJ | 학술논문

目的构建唾液酸合成酶基因1(neuB1)失活、脂多糖(LPS)中唾液酸(SA)缺失的空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni, Cj)O∶19突变株,以确认Cj LPS中,含SA基团的终端GM1样结构在Cj相关格林-巴利综合征(GBS)发病机理中的关键作用. 方法从已有neuB1基因失活的Cj肠炎相关菌株O∶2 DNA中,将含卡那霉素抗性基因(KmR cassette)的neuB1突变片段--neuB1::KmR克隆到pGEM-T载体,形成突变载体pGEM-neuB1::KmR,进一步转化到与GBS相关的Cj O∶19野生株,获得Cj O∶19突变株,行PCR和RT-PCR鉴定.SDS-PAGE分析Cj LPS,过碘酸-间苯二酚和酸性茚三酮反应法分别检测Cj LPS中SA.霍乱毒素B亚单位(CTB)结合反应检测Cj菌体裂解物及LPS中神经节苷脂GM1模拟结构.最后以突变株及其同源野生株LPS为抗原分别免疫豚鼠,第5周取坐骨神经原纤维分离. 结果 neuB1基因突变片段--neuB1::KmR成功克隆到pGEM-T载体中,进而构建得neuB1基因失活的Cj突变株.后者LPS已丧失SA基团且不能与CTB结合,表明其菌体裂解物和LPS中已不存在GM1模拟结构.野生株LPS免疫组中,17.3%的坐骨神经原纤维发生免疫性损伤,明显高于PBS对照组(1.6%)和突变株LPS免疫组(2.4%);而突变株LPS免疫组与PBS对照组间差异无统计学意义. 结论成功构建neuB1基因失活的Cj O∶19突变株,其LPS已缺失野生株所具有的SA基团及与GM1的分子模拟特性,且不能再诱导活体动物的周围神经免疫性损伤,有力证实了关于Cj LPS诱发GBS的分子模拟推论,SA是该交叉免疫反应中抗原的重要成分.
목적구건타액산합성매기인1(neuB1)실활、지다당(LPS)중타액산(SA)결실적공장만곡균(Campylobacter jejuni, Cj)O∶19돌변주,이학인Cj LPS중,함SA기단적종단GM1양결구재Cj상관격림-파리종합정(GBS)발병궤리중적관건작용. 방법종이유neuB1기인실활적Cj장염상관균주O∶2 DNA중,장함잡나매소항성기인(KmR cassette)적neuB1돌변편단--neuB1::KmR극륭도pGEM-T재체,형성돌변재체pGEM-neuB1::KmR,진일보전화도여GBS상관적Cj O∶19야생주,획득Cj O∶19돌변주,행PCR화RT-PCR감정.SDS-PAGE분석Cj LPS,과전산-간분이분화산성인삼동반응법분별검측Cj LPS중SA.곽란독소B아단위(CTB)결합반응검측Cj균체렬해물급LPS중신경절감지GM1모의결구.최후이돌변주급기동원야생주LPS위항원분별면역돈서,제5주취좌골신경원섬유분리. 결과 neuB1기인돌변편단--neuB1::KmR성공극륭도pGEM-T재체중,진이구건득neuB1기인실활적Cj돌변주.후자LPS이상실SA기단차불능여CTB결합,표명기균체렬해물화LPS중이불존재GM1모의결구.야생주LPS면역조중,17.3%적좌골신경원섬유발생면역성손상,명현고우PBS대조조(1.6%)화돌변주LPS면역조(2.4%);이돌변주LPS면역조여PBS대조조간차이무통계학의의. 결론성공구건neuB1기인실활적Cj O∶19돌변주,기LPS이결실야생주소구유적SA기단급여GM1적분자모의특성,차불능재유도활체동물적주위신경면역성손상,유력증실료관우Cj LPS유발GBS적분자모의추론,SA시해교차면역반응중항원적중요성분.