第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2005年
2期
174-176,180
,共4页
曹永宽%莫永炎%田伏洲%刘亚伟%邓鹏%秦清和%姜勇
曹永寬%莫永炎%田伏洲%劉亞偉%鄧鵬%秦清和%薑勇
조영관%막영염%전복주%류아위%산붕%진청화%강용
AWP1%绿色荧光蛋白%293细胞
AWP1%綠色熒光蛋白%293細胞
AWP1%록색형광단백%293세포
目的克隆、构建绿色荧光蛋白(GFP)-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)表达载体,观察AWP1在293细胞中表达和定位.方法采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞中扩增AWP1 cDNA编码区,并将其重组于GFP表达载体pEGFP-C2中.经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过DOTAP脂质体介导,转染293细胞.荧光显微镜观察AWP1在细胞内的表达和分布.结果GFP-AWP1融合基因表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在293细胞中获得了高效表达.荧光显微镜下,在不携带外源基因的空载体pEGFP-C2转染的对照组293细胞,绿色荧光均匀分布于整个细胞中;在重组质粒pEGFP-C2/AWP1转染的293细胞,绿色荧光弥散分布于细胞质内.结论成功构建GFP-AWP1融合基因表达载体并表达于293细胞胞质中.
目的剋隆、構建綠色熒光蛋白(GFP)-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)錶達載體,觀察AWP1在293細胞中錶達和定位.方法採用逆轉錄PCR(RT-PCR)法從人ECV304內皮細胞中擴增AWP1 cDNA編碼區,併將其重組于GFP錶達載體pEGFP-C2中.經酶切、序列鑒定分析後,將該重組質粒通過DOTAP脂質體介導,轉染293細胞.熒光顯微鏡觀察AWP1在細胞內的錶達和分佈.結果GFP-AWP1融閤基因錶達載體經酶切鑒定和測序分析確認構建成功,併在293細胞中穫得瞭高效錶達.熒光顯微鏡下,在不攜帶外源基因的空載體pEGFP-C2轉染的對照組293細胞,綠色熒光均勻分佈于整箇細胞中;在重組質粒pEGFP-C2/AWP1轉染的293細胞,綠色熒光瀰散分佈于細胞質內.結論成功構建GFP-AWP1融閤基因錶達載體併錶達于293細胞胞質中.
목적극륭、구건록색형광단백(GFP)-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)표체재체,관찰AWP1재293세포중표체화정위.방법채용역전록PCR(RT-PCR)법종인ECV304내피세포중확증AWP1 cDNA편마구,병장기중조우GFP표체재체pEGFP-C2중.경매절、서렬감정분석후,장해중조질립통과DOTAP지질체개도,전염293세포.형광현미경관찰AWP1재세포내적표체화분포.결과GFP-AWP1융합기인표체재체경매절감정화측서분석학인구건성공,병재293세포중획득료고효표체.형광현미경하,재불휴대외원기인적공재체pEGFP-C2전염적대조조293세포,록색형광균균분포우정개세포중;재중조질립pEGFP-C2/AWP1전염적293세포,록색형광미산분포우세포질내.결론성공구건GFP-AWP1융합기인표체재체병표체우293세포포질중.
