CAJ | 학술논문

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关.为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRV Ea株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer 4.1-CMV neo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12.同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5'端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP.将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论.这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础.
EP0기인시위광견병독(Pseudorabies virus, PRV)적조기기인,가능여병독복제급잠복감염등유관.위료사선특이성억제EP0기인표체적siRNA서렬,본연구안조Ambion공사공포적siRNA분자설계원칙,설계병합성료3개침대PRV Ea주EP0기인적siRNA모판EP04、EP08화EP12,분별극륭도이CMV계동자적siRNA표체재체pSilencer 4.1-CMV neo중,구건상응적중조표체질립p4.1-EP04、p4.1-EP08화p4.1-EP12.동시,장EP0기인적편마구극륭도진핵표체재체pEGFP-N3중,안조독마광가여EGFP기인적5'단융합,획득중조표체질립pEP0-EGFP.장p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12화음성대조질립p4.1-NK분별여pEP0-EGFP공전염IBRS-2세포,형광현미경관찰、류식세포의화반정량RT-PCR검측결과표명,삼개siRNA분자균능불동정도지억제EP0기인적표체,억제효솔종고도저의차위EP08、EP12화EP04;재진일보적병독감염실험중야득도료여세포전염모형일치적결론.저위심입연구EP0기인재PRV복제화잠복감염중적작용전정료기출.