中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
21期
4049-4053
,共5页
赵林娜%李建斌%单泓%段艳丽%焦红亮%宁晓琳%马会娟%杨朋辉%龚桂玲
趙林娜%李建斌%單泓%段豔麗%焦紅亮%寧曉琳%馬會娟%楊朋輝%龔桂玲
조림나%리건빈%단홍%단염려%초홍량%저효림%마회연%양붕휘%공계령
脐血间质干细胞%神经元样细胞%诱导分化%影响因素
臍血間質榦細胞%神經元樣細胞%誘導分化%影響因素
제혈간질간세포%신경원양세포%유도분화%영향인소
背景:研究证明脐血间质干细胞可向神经元样细胞分化,要同时保证脐血间质干细胞的扩增能力与分化潜能.其培养和诱导分化条件的优化显得尤为重要.目的:分析筛选人脐血间质干细胞向神经元样细胞体外诱导分化过程的影响因素.设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-08/2007-05在河南省红十字血液中心血液成分应用研究所完成.材料:脐血来自郑州市妇幼保健院正常足月分娩的胎儿,平均采血量95mL.重组人表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子购自Sigma公司:分离细胞所用的四联袋为山东威高集团公司产品.方法:取采集6h内的脐血,采用四联袋密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,以5×109L-1接种于DMEM/F12培养基中.[1]细胞因子实验:单独细胞因子组加入20μg/L B27、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子:细胞因子联合组在此基础上加入5μg/L重组人表皮生长因子.[2]红细胞混入量实验:裂解组加入红细胞裂解液1mL,裂解后红细胞混入量为(0.44+±0.13)×108/份:少红细胞组红细胞混入量为(0.51±0.21)×108/份,多红细胞组红细胞混入量为(2.65±1.28)×108/份.[3]首次换液时间实验:分别于接种后48h、7d首次换液.[4]诱导分化:将碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子共诱导7d的细胞爬片进行巢蛋白免疫组织化学染色.主要观察指标:观察不同因素对脐血间质干细胞增殖分化的影响.检测诱导分化后神经干细胞巢蛋白的表达.结果:培养7d后,表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子联合诱导促细胞增殖的效果优于单独应用碱性成纤维细胞生长因子(t=2.880,P<0.05);红细胞裂解液组、多红细胞组贴壁细胞数明显低于少红细胞组(t=7.332～7.550,P<0.05),即混入的红细胞总量不大于108/份对细胞增殖无影响:接种后7d首次换液所获贴壁细胞数明显多于接种后48h首次换液(P<0.05).两种细胞因子共诱导后,神经干细胞巢蛋白呈阳性表达.结论:在脐血间质干细胞向神经元样细胞诱导分化过程中,细胞因子、红细胞混入量及首次换液时间都是重要的影响因素.
揹景:研究證明臍血間質榦細胞可嚮神經元樣細胞分化,要同時保證臍血間質榦細胞的擴增能力與分化潛能.其培養和誘導分化條件的優化顯得尤為重要.目的:分析篩選人臍血間質榦細胞嚮神經元樣細胞體外誘導分化過程的影響因素.設計、時間及地點:隨機對照實驗,于2006-08/2007-05在河南省紅十字血液中心血液成分應用研究所完成.材料:臍血來自鄭州市婦幼保健院正常足月分娩的胎兒,平均採血量95mL.重組人錶皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子購自Sigma公司:分離細胞所用的四聯袋為山東威高集糰公司產品.方法:取採集6h內的臍血,採用四聯袋密度梯度離心法分離臍血單箇覈細胞,以5×109L-1接種于DMEM/F12培養基中.[1]細胞因子實驗:單獨細胞因子組加入20μg/L B27、10μg/L堿性成纖維細胞生長因子:細胞因子聯閤組在此基礎上加入5μg/L重組人錶皮生長因子.[2]紅細胞混入量實驗:裂解組加入紅細胞裂解液1mL,裂解後紅細胞混入量為(0.44+±0.13)×108/份:少紅細胞組紅細胞混入量為(0.51±0.21)×108/份,多紅細胞組紅細胞混入量為(2.65±1.28)×108/份.[3]首次換液時間實驗:分彆于接種後48h、7d首次換液.[4]誘導分化:將堿性成纖維細胞生長因子、重組人錶皮生長因子共誘導7d的細胞爬片進行巢蛋白免疫組織化學染色.主要觀察指標:觀察不同因素對臍血間質榦細胞增殖分化的影響.檢測誘導分化後神經榦細胞巢蛋白的錶達.結果:培養7d後,錶皮生長因子與堿性成纖維細胞生長因子聯閤誘導促細胞增殖的效果優于單獨應用堿性成纖維細胞生長因子(t=2.880,P<0.05);紅細胞裂解液組、多紅細胞組貼壁細胞數明顯低于少紅細胞組(t=7.332～7.550,P<0.05),即混入的紅細胞總量不大于108/份對細胞增殖無影響:接種後7d首次換液所穫貼壁細胞數明顯多于接種後48h首次換液(P<0.05).兩種細胞因子共誘導後,神經榦細胞巢蛋白呈暘性錶達.結論:在臍血間質榦細胞嚮神經元樣細胞誘導分化過程中,細胞因子、紅細胞混入量及首次換液時間都是重要的影響因素.
배경:연구증명제혈간질간세포가향신경원양세포분화,요동시보증제혈간질간세포적확증능력여분화잠능.기배양화유도분화조건적우화현득우위중요.목적:분석사선인제혈간질간세포향신경원양세포체외유도분화과정적영향인소.설계、시간급지점:수궤대조실험,우2006-08/2007-05재하남성홍십자혈액중심혈액성분응용연구소완성.재료:제혈래자정주시부유보건원정상족월분면적태인,평균채혈량95mL.중조인표피생장인자、감성성섬유세포생장인자구자Sigma공사:분리세포소용적사련대위산동위고집단공사산품.방법:취채집6h내적제혈,채용사련대밀도제도리심법분리제혈단개핵세포,이5×109L-1접충우DMEM/F12배양기중.[1]세포인자실험:단독세포인자조가입20μg/L B27、10μg/L감성성섬유세포생장인자:세포인자연합조재차기출상가입5μg/L중조인표피생장인자.[2]홍세포혼입량실험:렬해조가입홍세포렬해액1mL,렬해후홍세포혼입량위(0.44+±0.13)×108/빈:소홍세포조홍세포혼입량위(0.51±0.21)×108/빈,다홍세포조홍세포혼입량위(2.65±1.28)×108/빈.[3]수차환액시간실험:분별우접충후48h、7d수차환액.[4]유도분화:장감성성섬유세포생장인자、중조인표피생장인자공유도7d적세포파편진행소단백면역조직화학염색.주요관찰지표:관찰불동인소대제혈간질간세포증식분화적영향.검측유도분화후신경간세포소단백적표체.결과:배양7d후,표피생장인자여감성성섬유세포생장인자연합유도촉세포증식적효과우우단독응용감성성섬유세포생장인자(t=2.880,P<0.05);홍세포렬해액조、다홍세포조첩벽세포수명현저우소홍세포조(t=7.332～7.550,P<0.05),즉혼입적홍세포총량불대우108/빈대세포증식무영향:접충후7d수차환액소획첩벽세포수명현다우접충후48h수차환액(P<0.05).량충세포인자공유도후,신경간세포소단백정양성표체.결론:재제혈간질간세포향신경원양세포유도분화과정중,세포인자、홍세포혼입량급수차환액시간도시중요적영향인소.
