医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2011年
1期
5-10
,共6页
蒋玥%赵静%华美娟%甄鑫%胡娅莉%颜桂军%孙海翔
蔣玥%趙靜%華美娟%甄鑫%鬍婭莉%顏桂軍%孫海翔
장모%조정%화미연%견흠%호아리%안계군%손해상
Nur77%催乳素%蜕膜化%人子宫内膜间质细胞
Nur77%催乳素%蛻膜化%人子宮內膜間質細胞
Nur77%최유소%세막화%인자궁내막간질세포
目的 蜕膜化催乳素在妊娠的建立与维持中具有重要作用,但目前对参与蜕膜化催乳素表达调节因子的研究较少.文章旨在探讨孤儿核受体Nur77在人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中对蜕膜化标志基因(Prolactin, PRL)的作用. 方法 制备Ad-Flag-Nur77重组腺病毒,通过荧光素酶报告基因和荧光定量PCR结合重组腺病毒介导的Nur77过表达及小干扰RNA沉默Nur77基因的实验,阐述Nur77对蜕膜催乳素的调控作用. 结果成功获得滴度为8×1010ifu/ml的重组Nur77腺病毒,该腺病毒可在子宫内膜间质细胞中高表达Flag-Nur77融合蛋白;体外培养的人子宫内膜间质细胞经8-Br-cAMP和甲羟孕酮(medroxy progesterone, MPA)刺激后,Nur77的表达明显增加,并在体外诱导蜕膜化培养的第3天达到高峰;过表达Nur77可明显上调人子宫内膜间质细胞中dPRL(-332/+65)启动子活性>4倍,并以浓度依赖的方式明显增加人子宫内膜间质细胞中PRL mRNA的表达,P<0.01;功能缺失实验进一步表明基因沉默内源性Nur77蛋白表达明显抑制dPRL启动子活性达60%,同时显著抑制8-Br-cAMP和MPA诱导的人子宫内膜间质细胞中PRL mRNA的表达,P<0.01. 结论孤儿核受体Nur77参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控.
目的 蛻膜化催乳素在妊娠的建立與維持中具有重要作用,但目前對參與蛻膜化催乳素錶達調節因子的研究較少.文章旨在探討孤兒覈受體Nur77在人子宮內膜間質細胞蛻膜化過程中對蛻膜化標誌基因(Prolactin, PRL)的作用. 方法 製備Ad-Flag-Nur77重組腺病毒,通過熒光素酶報告基因和熒光定量PCR結閤重組腺病毒介導的Nur77過錶達及小榦擾RNA沉默Nur77基因的實驗,闡述Nur77對蛻膜催乳素的調控作用. 結果成功穫得滴度為8×1010ifu/ml的重組Nur77腺病毒,該腺病毒可在子宮內膜間質細胞中高錶達Flag-Nur77融閤蛋白;體外培養的人子宮內膜間質細胞經8-Br-cAMP和甲羥孕酮(medroxy progesterone, MPA)刺激後,Nur77的錶達明顯增加,併在體外誘導蛻膜化培養的第3天達到高峰;過錶達Nur77可明顯上調人子宮內膜間質細胞中dPRL(-332/+65)啟動子活性>4倍,併以濃度依賴的方式明顯增加人子宮內膜間質細胞中PRL mRNA的錶達,P<0.01;功能缺失實驗進一步錶明基因沉默內源性Nur77蛋白錶達明顯抑製dPRL啟動子活性達60%,同時顯著抑製8-Br-cAMP和MPA誘導的人子宮內膜間質細胞中PRL mRNA的錶達,P<0.01. 結論孤兒覈受體Nur77參與8-Br-cAMP和MPA誘導子宮內膜間質細胞蛻膜化過程中PRL的錶達調控.
목적 세막화최유소재임신적건립여유지중구유중요작용,단목전대삼여세막화최유소표체조절인자적연구교소.문장지재탐토고인핵수체Nur77재인자궁내막간질세포세막화과정중대세막화표지기인(Prolactin, PRL)적작용. 방법 제비Ad-Flag-Nur77중조선병독,통과형광소매보고기인화형광정량PCR결합중조선병독개도적Nur77과표체급소간우RNA침묵Nur77기인적실험,천술Nur77대세막최유소적조공작용. 결과성공획득적도위8×1010ifu/ml적중조Nur77선병독,해선병독가재자궁내막간질세포중고표체Flag-Nur77융합단백;체외배양적인자궁내막간질세포경8-Br-cAMP화갑간잉동(medroxy progesterone, MPA)자격후,Nur77적표체명현증가,병재체외유도세막화배양적제3천체도고봉;과표체Nur77가명현상조인자궁내막간질세포중dPRL(-332/+65)계동자활성>4배,병이농도의뢰적방식명현증가인자궁내막간질세포중PRL mRNA적표체,P<0.01;공능결실실험진일보표명기인침묵내원성Nur77단백표체명현억제dPRL계동자활성체60%,동시현저억제8-Br-cAMP화MPA유도적인자궁내막간질세포중PRL mRNA적표체,P<0.01. 결론고인핵수체Nur77삼여8-Br-cAMP화MPA유도자궁내막간질세포세막화과정중PRL적표체조공.
