重组人干细胞因子-血小板生成素融合蛋白的表达及活性初步研究
중조인간세포인자-혈소판생성소융합단백적표체급활성초보연구
A preliminary study on the expression and biological function of recombinant human SCF-TPO fusion protein
  • 万方数据
    中华血液学杂志 중화혈액학잡지
    Chinese Journal of Hematology
    2005年 1期 19-22 ,共4页

    刘楠%奚永志%郭斯启%孙玉英%袁志宏%崔建武%习彩霞%梁飞%孔繁华

    류남%해영지%곽사계%손옥영%원지굉%최건무%습채하%량비%공번화

    干细胞因子%血小板生成素%融合蛋白质类,SCF-TPO%生物学活性 榦細胞因子%血小闆生成素%融閤蛋白質類,SCF-TPO%生物學活性
    간세포인자%혈소판생성소%융합단백질류,SCF-TPO%생물학활성
    目的研究重组人干细胞因子-血小板生成素(SCF-TPO)融合蛋白表达的最佳条件及其生物学活性.方法设计引物,利用RT-PCR从胎肝细胞中扩增到SCF和TPO氨基端功能区片段,采用基因融合新策略将其融合成SCF-TPO融合基因,克隆到pGEM-T载体中,构建pET32a/SCF-TPO融合基因原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)plysS中经异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导其高表达SCF-TPO,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot检测.目的蛋白经包涵体变性,金属螯合层析纯化,透析复性,用细胞因子依赖细胞系MO7e进行细胞增殖实验.结果获得SCF-TPO融合基因的高表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.Western blot法鉴定表达正确,MTT法证明该融合蛋白具有细胞增殖活性,浓度为100ng/ml时刺激活性更强.结论表达并复性后的重组人SCF-TPO融合蛋白具有刺激MO7e细胞生长活性.
    목적연구중조인간세포인자-혈소판생성소(SCF-TPO)융합단백표체적최가조건급기생물학활성.방법설계인물,이용RT-PCR종태간세포중확증도SCF화TPO안기단공능구편단,채용기인융합신책략장기융합성SCF-TPO융합기인,극륭도pGEM-T재체중,구건pET32a/SCF-TPO융합기인원핵표체재체,재숙주균E.coliBL21(DE3)plysS중경이병기-β-D-류대반유당(IPTG)유도기고표체SCF-TPO,SDS-취병희선알응효전영화Western blot검측.목적단백경포함체변성,금속오합층석순화,투석복성,용세포인자의뢰세포계MO7e진행세포증식실험.결과획득SCF-TPO융합기인적고표체,표체량점균체총단백적30%이상.Western blot법감정표체정학,MTT법증명해융합단백구유세포증식활성,농도위100ng/ml시자격활성경강.결론표체병복성후적중조인SCF-TPO융합단백구유자격MO7e세포생장활성.
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