第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2005年
4期
317-319
,共3页
黄正根%刘昕%高玉梅%蔡瑜娇%由莉越%罗勇军
黃正根%劉昕%高玉梅%蔡瑜嬌%由莉越%囉勇軍
황정근%류흔%고옥매%채유교%유리월%라용군
尿嘧啶-DNA糖基化酶%16S rDNA%片段化%PCR%dUTP%dTTP
尿嘧啶-DNA糖基化酶%16S rDNA%片段化%PCR%dUTP%dTTP
뇨밀정-DNA당기화매%16S rDNA%편단화%PCR%dUTP%dTTP
目的探讨细菌16S rDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法.方法设计针对细菌16S rDNA基因全长的通用引物,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP,扩增长度为1.5 kb的片段,用尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP后,再经浓氨水特异性断开DNA双链上原dUTP处的磷酸二酯键,然后用聚丙烯酰胺凝受胶电泳(PAGE)和琼脂糖电泳确认片段化的效果.结果本实验选用的基因当dUTP与dTTP的比例在3∶7～1∶1时,都能够获得比较理想的片段化结果.结论通过控制一定的dUTP掺入比例再经UDG及氨水处理能够得到稳定的片段化结果.
目的探討細菌16S rDNA檢測芯片雜交前的樣本處理優化方法.方法設計針對細菌16S rDNA基因全長的通用引物,通過PCR時摻入一定比例的dUTP替代dTTP,擴增長度為1.5 kb的片段,用尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)消化處理摻入到雙鏈上的dUTP後,再經濃氨水特異性斷開DNA雙鏈上原dUTP處的燐痠二酯鍵,然後用聚丙烯酰胺凝受膠電泳(PAGE)和瓊脂糖電泳確認片段化的效果.結果本實驗選用的基因噹dUTP與dTTP的比例在3∶7～1∶1時,都能夠穫得比較理想的片段化結果.結論通過控製一定的dUTP摻入比例再經UDG及氨水處理能夠得到穩定的片段化結果.
목적탐토세균16S rDNA검측심편잡교전적양본처리우화방법.방법설계침대세균16S rDNA기인전장적통용인물,통과PCR시참입일정비례적dUTP체대dTTP,확증장도위1.5 kb적편단,용뇨밀정-DNA당기화매(UDG)소화처리참입도쌍련상적dUTP후,재경농안수특이성단개DNA쌍련상원dUTP처적린산이지건,연후용취병희선알응수효전영(PAGE)화경지당전영학인편단화적효과.결과본실험선용적기인당dUTP여dTTP적비례재3∶7～1∶1시,도능구획득비교이상적편단화결과.결론통과공제일정적dUTP참입비례재경UDG급안수처리능구득도은정적편단화결과.
