微循环学杂志
微循環學雜誌
미순배학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROCIRCULATION
2005年
4期
6-8,11
,共4页
陈华华%欧阳静萍%王保华%杨悦%郑汉巧
陳華華%歐暘靜萍%王保華%楊悅%鄭漢巧
진화화%구양정평%왕보화%양열%정한교
人α-防御素-1%真核表达载体%转染
人α-防禦素-1%真覈錶達載體%轉染
인α-방어소-1%진핵표체재체%전염
目的:构建人α-防御素-1(α-HNP-1)基因的真核表达载体,并且转染大鼠骨髓间充质干细胞.方法:提取人外周血粒细胞中的总RNA,反转录为cDNA作为模板,采用PCR的方法扩增得到人α-防御素-1(α-HNP-1)的基因片断.将扩增产物连接入pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,蓝白筛选,对PCR及酶切鉴定含有目的片断的克隆进行测序.经测序证实无误后,将获得的pGEM-T-HNP-1重组质粒上的α-HNP-1基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上,构建HNP-1的真核表达载体pcDNA3.1-HNP-1.将真核表达载体pcDNA3.1-HNP-1用脂质体法转染原代大鼠骨髓间充质干细胞,用免疫组化法检测α-HNP-1的表达.结果:获得预期大小为303bp的RT-PCR产物; 经PCR、酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-HNP-1构建正确;免疫组化法显示转染细胞呈阳性反应.结论:成功构建HNP-1基因的真核表达载体,并且在大鼠骨髓间充质干细胞中能成功表达.
目的:構建人α-防禦素-1(α-HNP-1)基因的真覈錶達載體,併且轉染大鼠骨髓間充質榦細胞.方法:提取人外週血粒細胞中的總RNA,反轉錄為cDNA作為模闆,採用PCR的方法擴增得到人α-防禦素-1(α-HNP-1)的基因片斷.將擴增產物連接入pGEM-T載體,轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞,藍白篩選,對PCR及酶切鑒定含有目的片斷的剋隆進行測序.經測序證實無誤後,將穫得的pGEM-T-HNP-1重組質粒上的α-HNP-1基因亞剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1(-)上,構建HNP-1的真覈錶達載體pcDNA3.1-HNP-1.將真覈錶達載體pcDNA3.1-HNP-1用脂質體法轉染原代大鼠骨髓間充質榦細胞,用免疫組化法檢測α-HNP-1的錶達.結果:穫得預期大小為303bp的RT-PCR產物; 經PCR、酶切鑒定和DNA測序分析證實重組質粒載體pcDNA3.1-HNP-1構建正確;免疫組化法顯示轉染細胞呈暘性反應.結論:成功構建HNP-1基因的真覈錶達載體,併且在大鼠骨髓間充質榦細胞中能成功錶達.
목적:구건인α-방어소-1(α-HNP-1)기인적진핵표체재체,병차전염대서골수간충질간세포.방법:제취인외주혈립세포중적총RNA,반전록위cDNA작위모판,채용PCR적방법확증득도인α-방어소-1(α-HNP-1)적기인편단.장확증산물련접입pGEM-T재체,전화대장간균DH5α감수태세포,람백사선,대PCR급매절감정함유목적편단적극륭진행측서.경측서증실무오후,장획득적pGEM-T-HNP-1중조질립상적α-HNP-1기인아극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(-)상,구건HNP-1적진핵표체재체pcDNA3.1-HNP-1.장진핵표체재체pcDNA3.1-HNP-1용지질체법전염원대대서골수간충질간세포,용면역조화법검측α-HNP-1적표체.결과:획득예기대소위303bp적RT-PCR산물; 경PCR、매절감정화DNA측서분석증실중조질립재체pcDNA3.1-HNP-1구건정학;면역조화법현시전염세포정양성반응.결론:성공구건HNP-1기인적진핵표체재체,병차재대서골수간충질간세포중능성공표체.
