CAJ | 학술논문

制备抗弓形虫天然P30、重组P30的单克隆抗体(mAb),并研究它们对虫体的影响,为弓形虫病诊断及保护性抗原鉴定奠定基础.采用弓形虫天然P30、重组P30及全虫抗原(对照)分别免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选稳定分泌高滴度mAb的杂交瘤细胞株.用ELISA法测定mAb亚类和效价;通过SDS PAGE和West-ern blot进行特异性鉴定;Giemsa染色观察杂交瘤细胞的染色体数目;利用扫描电镜及间接荧光抗体试验(IFAT)观察mAb对弓形虫的杀伤作用及其靶抗原定位.结果表明,筛选出2株(2B3、1H6)特异性较好、能稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株.Western blot结果显示,2B3、1H6产生的mAb与弓形虫全抗原的阳性反应带均在30 000 Mr处;mAb亚类均属IgM,其效价(ELISA)分别为:2B3 1:102 400、1H6 1:51 200;2株细胞的染色体数均在100条以上.电镜观察与mAb作用后的弓形虫虫体聚集、肿胀,膜变厚,表面出现缺口和空洞,甚至虫体变形、破碎.抗弓形虫天然P30的mAb能识别重组体pET 30a-P30的表达蛋白.成功制备了抗弓形虫天然P30、重组P30的mAb,可进一步用于弓形虫病诊断及保护性抗原鉴定研究.
제비항궁형충천연P30、중조P30적단극륭항체(mAb),병연구타문대충체적영향,위궁형충병진단급보호성항원감정전정기출.채용궁형충천연P30、중조P30급전충항원(대조)분별면역BALB/c소서,취면역소서비세포여SP2/0골수류세포융합,사선은정분비고적도mAb적잡교류세포주.용ELISA법측정mAb아류화효개;통과SDS PAGE화West-ern blot진행특이성감정;Giemsa염색관찰잡교류세포적염색체수목;이용소묘전경급간접형광항체시험(IFAT)관찰mAb대궁형충적살상작용급기파항원정위.결과표명,사선출2주(2B3、1H6)특이성교호、능은정분비mAb적잡교류세포주.Western blot결과현시,2B3、1H6산생적mAb여궁형충전항원적양성반응대균재30 000 Mr처;mAb아류균속IgM,기효개(ELISA)분별위:2B3 1:102 400、1H6 1:51 200;2주세포적염색체수균재100조이상.전경관찰여mAb작용후적궁형충충체취집、종창,막변후,표면출현결구화공동,심지충체변형、파쇄.항궁형충천연P30적mAb능식별중조체pET 30a-P30적표체단백.성공제비료항궁형충천연P30、중조P30적mAb,가진일보용우궁형충병진단급보호성항원감정연구.