生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
1期
21-26
,共6页
陆海荣%李国栋%吴宏宇%黄晋江%汪世龙%黄青山
陸海榮%李國棟%吳宏宇%黃晉江%汪世龍%黃青山
륙해영%리국동%오굉우%황진강%왕세룡%황청산
抗菌肽%融合蛋白%大肠杆菌
抗菌肽%融閤蛋白%大腸桿菌
항균태%융합단백%대장간균
为高效表达抗菌肽GK1并避免GK1的高抗菌活性对大肠杆菌宿主菌的致命影响,将经改造后的人胰岛素原(mhP1)与GK1的融合基因(mhPI-GK1)克隆到表达载体pET28a中,构建出表达质粒pET28a-mhPI-GK1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20%.经CNBr裂解、阳离子交换层析和RP-HPLC纯化后,每升发酵液可获得5.7 mg纯度大于97%的重组GK1.质谱检测显示重组GK1的分子量为2794.0D,抑菌活性实验表明纯化后的重组GK1和化学合成GK1具有相同的抗菌活性.为利用基因工程方法大规模生产GK1奠定了基础.
為高效錶達抗菌肽GK1併避免GK1的高抗菌活性對大腸桿菌宿主菌的緻命影響,將經改造後的人胰島素原(mhP1)與GK1的融閤基因(mhPI-GK1)剋隆到錶達載體pET28a中,構建齣錶達質粒pET28a-mhPI-GK1,轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中進行錶達.融閤蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式錶達,錶達量佔菌體總蛋白的20%.經CNBr裂解、暘離子交換層析和RP-HPLC純化後,每升髮酵液可穫得5.7 mg純度大于97%的重組GK1.質譜檢測顯示重組GK1的分子量為2794.0D,抑菌活性實驗錶明純化後的重組GK1和化學閤成GK1具有相同的抗菌活性.為利用基因工程方法大規模生產GK1奠定瞭基礎.
위고효표체항균태GK1병피면GK1적고항균활성대대장간균숙주균적치명영향,장경개조후적인이도소원(mhP1)여GK1적융합기인(mhPI-GK1)극륭도표체재체pET28a중,구건출표체질립pET28a-mhPI-GK1,전화지대장간균BL21(DE3)중진행표체.융합단백재대장간균중이포함체형식표체,표체량점균체총단백적20%.경CNBr렬해、양리자교환층석화RP-HPLC순화후,매승발효액가획득5.7 mg순도대우97%적중조GK1.질보검측현시중조GK1적분자량위2794.0D,억균활성실험표명순화후적중조GK1화화학합성GK1구유상동적항균활성.위이용기인공정방법대규모생산GK1전정료기출.
