CAJ | 학술논문

泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是具有高度选择性的蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用.本研究根据GenBank已登录的真核生物泛素(ubiquitin)编码框的氨基酸序列,设计一对简并引物,RT-PCR克隆了家蝇Musca domestica泛素基因的编码区cDNA序列,并进行了测序.序列分析表明,该编码区的长度为228 bp,编码76个氨基酸,命名为Mdubi,GenBank登录号为DQ115796.同源性比较发现,Mdubi氨基酸序列与其他真核生物泛素编码框同源性可达94%以上.RT-PCR检测表明,Mdubi在家蝇不同组织中均高效表达,且不受大肠杆菌Escherichia coli刺激的影响,是遍在性表达.为进一步研究Mdubi的结构和功能,将Mdubi克隆到原核表达载体pQE30上,构建重组质粒pQE30-UBI,转化大肠杆菌M15感受态细胞,在IPTG诱导下进行了高效表达,SDS-PAGE检测表明Mdubi在大肠杆菌中可表达相对分子质量为9.6 kD的可溶性融合蛋白;Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA鏊合物特异性的结合,表明表达的Mdubi为N端带有6His标签的融合蛋白.利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了Mdubi,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗Mdubi血清.本研究成功克隆了家蝇泛素的编码序列,并在原核细胞中得到了表达,为进一步研究泛素在家蝇体内的作用机制奠定了基础.
범소-단백매체도경(ubiquitin-proteasome pathway)시구유고도선택성적단백질강해도경,해도경대세포내단백적선택성강해기착중요작용.본연구근거GenBank이등록적진핵생물범소(ubiquitin)편마광적안기산서렬,설계일대간병인물,RT-PCR극륭료가승Musca domestica범소기인적편마구cDNA서렬,병진행료측서.서렬분석표명,해편마구적장도위228 bp,편마76개안기산,명명위Mdubi,GenBank등록호위DQ115796.동원성비교발현,Mdubi안기산서렬여기타진핵생물범소편마광동원성가체94%이상.RT-PCR검측표명,Mdubi재가승불동조직중균고효표체,차불수대장간균Escherichia coli자격적영향,시편재성표체.위진일보연구Mdubi적결구화공능,장Mdubi극륭도원핵표체재체pQE30상,구건중조질립pQE30-UBI,전화대장간균M15감수태세포,재IPTG유도하진행료고효표체,SDS-PAGE검측표명Mdubi재대장간균중가표체상대분자질량위9.6 kD적가용성융합단백;Western blot분석표명표체산물능여Ni-NTA오합물특이성적결합,표명표체적Mdubi위N단대유6His표첨적융합단백.이용Ni2+-NTA친화주일보순화료Mdubi,이해융합단백면역신서란대백토제비료항Mdubi혈청.본연구성공극륭료가승범소적편마서렬,병재원핵세포중득도료표체,위진일보연구범소재가승체내적작용궤제전정료기출.