贵阳医学院学报
貴暘醫學院學報
귀양의학원학보
JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
2008年
4期
340-343
,共4页
核定位信号%载体蛋白质类%基因表达%蛋白纯化
覈定位信號%載體蛋白質類%基因錶達%蛋白純化
핵정위신호%재체단백질류%기인표체%단백순화
目的:构建绿色荧光蛋白一串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体(His-EGFP-3xNLs),并在原核细胞中进行表达与纯化.方法:采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来,使用常规酶切和连接方法将其重组至pET-14b载体中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用IPTG诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白.结果:构建的His-EGFP-3xNLs融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36kD的融合蛋白.结论:成功构建了His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究NLS介导信号分子人核提供了实验材料.
目的:構建綠色熒光蛋白一串聯重複覈定位信號融閤蛋白的錶達載體(His-EGFP-3xNLs),併在原覈細胞中進行錶達與純化.方法:採用PCR方法從原先剋隆在pEGFP-C1載體中的3xNLS與EGFP編碼序列擴增齣來,使用常規酶切和連接方法將其重組至pET-14b載體中,對暘性剋隆進行酶切、PCR和測序鑒定.轉化BL21(DE3)大腸桿菌株,用IPTG誘導融閤蛋白錶達,併利用Ni-NTA親和層析純化該融閤蛋白.結果:構建的His-EGFP-3xNLs融閤蛋白錶達載體是正確的,該載體可在大腸桿菌內高效錶達,用Ni-NTA純化穫得瞭相對分子質量約36kD的融閤蛋白.結論:成功構建瞭His-EGFP-3xNLS融閤蛋白錶達載體,併在原覈細胞中穫得瞭高效錶達和純化,為進一步研究NLS介導信號分子人覈提供瞭實驗材料.
목적:구건록색형광단백일천련중복핵정위신호융합단백적표체재체(His-EGFP-3xNLs),병재원핵세포중진행표체여순화.방법:채용PCR방법종원선극륭재pEGFP-C1재체중적3xNLS여EGFP편마서렬확증출래,사용상규매절화련접방법장기중조지pET-14b재체중,대양성극륭진행매절、PCR화측서감정.전화BL21(DE3)대장간균주,용IPTG유도융합단백표체,병이용Ni-NTA친화층석순화해융합단백.결과:구건적His-EGFP-3xNLs융합단백표체재체시정학적,해재체가재대장간균내고효표체,용Ni-NTA순화획득료상대분자질량약36kD적융합단백.결론:성공구건료His-EGFP-3xNLS융합단백표체재체,병재원핵세포중획득료고효표체화순화,위진일보연구NLS개도신호분자인핵제공료실험재료.
