微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2009年
1期
4-8,21
,共6页
王林%郭丹华%焦伯延%林万松%林建银%林旭
王林%郭丹華%焦伯延%林萬鬆%林建銀%林旭
왕림%곽단화%초백연%림만송%림건은%림욱
乙型肝炎病毒%末端蛋白%缺失突变%α干扰素
乙型肝炎病毒%末耑蛋白%缺失突變%α榦擾素
을형간염병독%말단단백%결실돌변%α간우소
为证实乙型肝炎病毒(HBV) 3022～1787核苷酸缺失突变体编码蛋白TS′X′(源于DNA聚合酶读码框架,T为TP区,S′为部分缺失的spacer区,X′为截短的X蛋白)具有抗α干扰素(IFN-α)作用并确定其功能区域,用聚合酶链反应(PCR)扩增获得TS′X′全长及片段TS′(含TP区及部分缺失的spacer区),并克隆于pcDNA3.1/HisC载体.重组质粒以FuGENE6转染Huh7肝细胞,48 h后裂解细胞,以蛋白质印迹法(Western blot)证实目的蛋白可在Huh7肝细胞中表达.重组质粒及空载体pcDNA3.1/HisC分别与IFN-α反应报告质粒p6-16CAT按分子数5∶1、10∶1、15∶1、30∶1 共转染Huh7肝细胞,转染后48 h给予终浓度为100 IU/ml 的IFN-α2a刺激,作用24 h后裂解细胞,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胞内氯霉素乙酰基转移酶(CAT)含量.结果显示,与空白载体相比,随着TS′X′及TS′重组表达质粒转染量的递增,Huh7胞内CAT值逐渐降低(n＝6,P<0.05),但TS′X′与TS′之间无显著差异(n＝6,P>0.05).本研究证实,HBV 3022～1787核苷酸缺失突变体编码的TS′X′蛋白可抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性,其活性与其N端TP及部分缺失的spacer区有关.
為證實乙型肝炎病毒(HBV) 3022～1787覈苷痠缺失突變體編碼蛋白TS′X′(源于DNA聚閤酶讀碼框架,T為TP區,S′為部分缺失的spacer區,X′為截短的X蛋白)具有抗α榦擾素(IFN-α)作用併確定其功能區域,用聚閤酶鏈反應(PCR)擴增穫得TS′X′全長及片段TS′(含TP區及部分缺失的spacer區),併剋隆于pcDNA3.1/HisC載體.重組質粒以FuGENE6轉染Huh7肝細胞,48 h後裂解細胞,以蛋白質印跡法(Western blot)證實目的蛋白可在Huh7肝細胞中錶達.重組質粒及空載體pcDNA3.1/HisC分彆與IFN-α反應報告質粒p6-16CAT按分子數5∶1、10∶1、15∶1、30∶1 共轉染Huh7肝細胞,轉染後48 h給予終濃度為100 IU/ml 的IFN-α2a刺激,作用24 h後裂解細胞,用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測胞內氯黴素乙酰基轉移酶(CAT)含量.結果顯示,與空白載體相比,隨著TS′X′及TS′重組錶達質粒轉染量的遞增,Huh7胞內CAT值逐漸降低(n＝6,P<0.05),但TS′X′與TS′之間無顯著差異(n＝6,P>0.05).本研究證實,HBV 3022～1787覈苷痠缺失突變體編碼的TS′X′蛋白可抑製Huh7細胞對IFN-α的反應性,其活性與其N耑TP及部分缺失的spacer區有關.
위증실을형간염병독(HBV) 3022～1787핵감산결실돌변체편마단백TS′X′(원우DNA취합매독마광가,T위TP구,S′위부분결실적spacer구,X′위절단적X단백)구유항α간우소(IFN-α)작용병학정기공능구역,용취합매련반응(PCR)확증획득TS′X′전장급편단TS′(함TP구급부분결실적spacer구),병극륭우pcDNA3.1/HisC재체.중조질립이FuGENE6전염Huh7간세포,48 h후렬해세포,이단백질인적법(Western blot)증실목적단백가재Huh7간세포중표체.중조질립급공재체pcDNA3.1/HisC분별여IFN-α반응보고질립p6-16CAT안분자수5∶1、10∶1、15∶1、30∶1 공전염Huh7간세포,전염후48 h급여종농도위100 IU/ml 적IFN-α2a자격,작용24 h후렬해세포,용매련면역흡부시험(ELISA)검측포내록매소을선기전이매(CAT)함량.결과현시,여공백재체상비,수착TS′X′급TS′중조표체질립전염량적체증,Huh7포내CAT치축점강저(n＝6,P<0.05),단TS′X′여TS′지간무현저차이(n＝6,P>0.05).본연구증실,HBV 3022～1787핵감산결실돌변체편마적TS′X′단백가억제Huh7세포대IFN-α적반응성,기활성여기N단TP급부분결실적spacer구유관.
