中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2009年
10期
927-930
,共4页
韩明月%潘秀珍%邵珠卿%葛俊超%王长军%唐家琪
韓明月%潘秀珍%邵珠卿%葛俊超%王長軍%唐傢琪
한명월%반수진%소주경%갈준초%왕장군%당가기
猪链球菌%溶血素样蛋白%克隆%表达
豬鏈毬菌%溶血素樣蛋白%剋隆%錶達
저련구균%용혈소양단백%극륭%표체
目的 克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein, HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体.方法 采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清.结果 构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清.结论 在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础.
目的 剋隆2型豬鏈毬菌溶血素樣蛋白(Hemolysin-like protein, HLP)編碼基因併進行原覈錶達,純化重組蛋白併製備相應的多剋隆抗體.方法 採用PCR法,從2型豬鏈毬菌中國彊毒株05ZYH33基因組擴增基因hlp,構建重組錶達質粒pET32a::hlp,轉化E.coli BL21(DE3),篩選暘性轉化子進行IPTG誘導錶達,SDS-PAGE鑒定錶達產物;His親和層析柱純化重組蛋白;重組蛋白免疫新西蘭兔製備多剋隆抗體,間接ELISA和Western blot檢測多抗血清.結果 構建的重組質粒在宿主菌中可高效錶達,His親和層析柱純化穫得較高純度的重組蛋白;重組蛋白免疫新西蘭兔後穫得高效價的抗血清.結論 在原覈繫統中成功地錶達瞭hlp基因編碼的蛋白,併以重組蛋白為抗原製備齣高效價的多抗血清,為進一步研究hlp基因的功能奠定瞭基礎.
목적 극륭2형저련구균용혈소양단백(Hemolysin-like protein, HLP)편마기인병진행원핵표체,순화중조단백병제비상응적다극륭항체.방법 채용PCR법,종2형저련구균중국강독주05ZYH33기인조확증기인hlp,구건중조표체질립pET32a::hlp,전화E.coli BL21(DE3),사선양성전화자진행IPTG유도표체,SDS-PAGE감정표체산물;His친화층석주순화중조단백;중조단백면역신서란토제비다극륭항체,간접ELISA화Western blot검측다항혈청.결과 구건적중조질립재숙주균중가고효표체,His친화층석주순화획득교고순도적중조단백;중조단백면역신서란토후획득고효개적항혈청.결론 재원핵계통중성공지표체료hlp기인편마적단백,병이중조단백위항원제비출고효개적다항혈청,위진일보연구hlp기인적공능전정료기출.
