安徽医学
安徽醫學
안휘의학
ANHUI MEDICAL JOURNAL
2010年
3期
201-204
,共4页
王兴满%汤仁树%赵俊%陈敬贤%王明丽
王興滿%湯仁樹%趙俊%陳敬賢%王明麗
왕흥만%탕인수%조준%진경현%왕명려
HCMV%pp65%DNA疫苗%质粒%纯化
HCMV%pp65%DNA疫苗%質粒%純化
HCMV%pp65%DNA역묘%질립%순화
目的 研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的纯化工艺,并建立质控标准.方法 对工程菌(DH5α/peDNA3.1-pp65)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定.结果 质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8～0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%.三批终产品全面质量检定均符合规定.结论 建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础.
目的 研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的純化工藝,併建立質控標準.方法 對工程菌(DH5α/peDNA3.1-pp65)的高效髮酵菌體採用堿裂解法進行質粒初提;三步柱層析(依次為分子篩層析、親和層析、陰離子層析)對質粒進行純化,檢測質粒含量、超螺鏇比例、內毒素等,最後對終產品質粒溶液進行全麵質量檢定.結果 質粒初提液通過分子篩層析後,去除瞭大量RNA、宿主DNA、內毒素等,再經親和柱純化後穫得瞭高比例的超螺鏇質粒DNA,達95%,經陰離子柱層析有效去除內毒素,質粒得率為0.8～0.95 mg/g菌,質粒總迴收率達72.7%.三批終產品全麵質量檢定均符閤規定.結論 建立瞭穩定的HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)純化工藝及質量控製標準,為進一步研究奠定瞭重要基礎.
목적 연구HCMV pp65 DNA역묘(pcDNA3.1-pp65)적순화공예,병건립질공표준.방법 대공정균(DH5α/peDNA3.1-pp65)적고효발효균체채용감렬해법진행질립초제;삼보주층석(의차위분자사층석、친화층석、음리자층석)대질립진행순화,검측질립함량、초라선비례、내독소등,최후대종산품질립용액진행전면질량검정.결과 질립초제액통과분자사층석후,거제료대량RNA、숙주DNA、내독소등,재경친화주순화후획득료고비례적초라선질립DNA,체95%,경음리자주층석유효거제내독소,질립득솔위0.8～0.95 mg/g균,질립총회수솔체72.7%.삼비종산품전면질량검정균부합규정.결론 건립료은정적HCMV pp65 DNA역묘(pcDNA3.1-pp65)순화공예급질량공제표준,위진일보연구전정료중요기출.
