中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2010年
17期
2475-2477
,共3页
肖莉杰%林平%陈文%姜颖%刘紫君%于晓光
肖莉傑%林平%陳文%薑穎%劉紫君%于曉光
초리걸%림평%진문%강영%류자군%우효광
降钙素基因相关肽衍生物%VY%优化%纯化
降鈣素基因相關肽衍生物%VY%優化%純化
강개소기인상관태연생물%VY%우화%순화
目的 优化重组降钙素基因相关肽衍生物(CGRP-VY)蛋白的表达体系,并利用亲和层析获得高纯度的重组蛋白.方法 在前期研究的基础上,将构建的pET-32a(+)-rhCGRP-VY在大肠埃希菌中表达,分别对时间、温度和IPTG的浓度进行优化.采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化可溶性蛋白,YLN凝胶影像分析系统和Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量.结果 重组蛋白的最佳表达条件为诱导时间4 h、诱导温度37℃、IPTG浓度0.75 mmol/L,重组蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的70%～80%,高效表达的CGRP-VY融合蛋白大部分可溶,纯化后蛋白纯度可达90%以上,蛋白浓度约为0.09 mg/ml.结论 成功优化了蛋白表达条件,并用亲和层析法纯化出大量可溶性TrxA-rhCGRP-VY.
目的 優化重組降鈣素基因相關肽衍生物(CGRP-VY)蛋白的錶達體繫,併利用親和層析穫得高純度的重組蛋白.方法 在前期研究的基礎上,將構建的pET-32a(+)-rhCGRP-VY在大腸埃希菌中錶達,分彆對時間、溫度和IPTG的濃度進行優化.採用Ni-NTA親和層析柱分離純化可溶性蛋白,YLN凝膠影像分析繫統和Bradford法檢測純化蛋白的純度與含量.結果 重組蛋白的最佳錶達條件為誘導時間4 h、誘導溫度37℃、IPTG濃度0.75 mmol/L,重組蛋白的最高錶達量佔菌體總蛋白的70%～80%,高效錶達的CGRP-VY融閤蛋白大部分可溶,純化後蛋白純度可達90%以上,蛋白濃度約為0.09 mg/ml.結論 成功優化瞭蛋白錶達條件,併用親和層析法純化齣大量可溶性TrxA-rhCGRP-VY.
목적 우화중조강개소기인상관태연생물(CGRP-VY)단백적표체체계,병이용친화층석획득고순도적중조단백.방법 재전기연구적기출상,장구건적pET-32a(+)-rhCGRP-VY재대장애희균중표체,분별대시간、온도화IPTG적농도진행우화.채용Ni-NTA친화층석주분리순화가용성단백,YLN응효영상분석계통화Bradford법검측순화단백적순도여함량.결과 중조단백적최가표체조건위유도시간4 h、유도온도37℃、IPTG농도0.75 mmol/L,중조단백적최고표체량점균체총단백적70%～80%,고효표체적CGRP-VY융합단백대부분가용,순화후단백순도가체90%이상,단백농도약위0.09 mg/ml.결론 성공우화료단백표체조건,병용친화층석법순화출대량가용성TrxA-rhCGRP-VY.
