中国癌症防治杂志
中國癌癥防治雜誌
중국암증방치잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY PREVENTION AND TREATMENT
2012年
1期
38-42
,共5页
王钦富%李志%牟红梅%徐娜%张雪梅%韩慧
王欽富%李誌%牟紅梅%徐娜%張雪梅%韓慧
왕흠부%리지%모홍매%서나%장설매%한혜
大肠癌%EID3%克隆%mRNA
大腸癌%EID3%剋隆%mRNA
대장암%EID3%극륭%mRNA
目的 研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值.方法 用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM-001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达,并利用Ni NTA His Bind树脂纯化该重组蛋白质.用RT-PCR技术研究EID3 mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达.结果 经PCR扩增成功获得1 002 bp的人EID3基因,测序正确.在大肠杆菌中目的 蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为39 000 KD,纯化后的6xHis EID3纯度可达92%.通过RT-PCR分析发现,EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39例阳性,阳性率为90.7%.在正常组织中,除睾丸组织不表达或有极低水平转录外,余均不表达.结论 EID3基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础.EID3 mRNA表达检测用于诊断大肠癌,可能具有高特异性和高敏感性的特点.EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答,可能成为一个新的大肠癌相关性抗原分子,其用于诊断大肠癌的可行性,有待进一步深入研究.
目的 研究新的大腸癌相關性抗原EID3基因的剋隆及其診斷價值.方法 用SEREX技術篩選睪汍組織cDNA噬菌體錶達文庫,髮現瞭一類似于腫瘤抑製基因(E1A基因)的EID3基因(NM-001008394.1),構建原覈錶達載體pET32k-EID3,IPTG誘導重組EID3蛋白質的錶達,併利用Ni NTA His Bind樹脂純化該重組蛋白質.用RT-PCR技術研究EID3 mRNA在正常組織和大腸癌傳代細胞的錶達.結果 經PCR擴增成功穫得1 002 bp的人EID3基因,測序正確.在大腸桿菌中目的 蛋白質的錶達量佔菌體總蛋白質的10%,SDS-PAGE及Western blot分析顯示,其相對分子質量為39 000 KD,純化後的6xHis EID3純度可達92%.通過RT-PCR分析髮現,EID3基因在43例大腸癌傳代細胞株中有39例暘性,暘性率為90.7%.在正常組織中,除睪汍組織不錶達或有極低水平轉錄外,餘均不錶達.結論 EID3基因剋隆、錶達及純化的成功,為其今後的腫瘤診斷和腫瘤多肽疫苗治療研究奠定瞭基礎.EID3 mRNA錶達檢測用于診斷大腸癌,可能具有高特異性和高敏感性的特點.EID3蛋白在大腸癌患者中能夠誘導機體的抗體免疫應答,可能成為一箇新的大腸癌相關性抗原分子,其用于診斷大腸癌的可行性,有待進一步深入研究.
목적 연구신적대장암상관성항원EID3기인적극륭급기진단개치.방법 용SEREX기술사선고환조직cDNA서균체표체문고,발현료일유사우종류억제기인(E1A기인)적EID3기인(NM-001008394.1),구건원핵표체재체pET32k-EID3,IPTG유도중조EID3단백질적표체,병이용Ni NTA His Bind수지순화해중조단백질.용RT-PCR기술연구EID3 mRNA재정상조직화대장암전대세포적표체.결과 경PCR확증성공획득1 002 bp적인EID3기인,측서정학.재대장간균중목적 단백질적표체량점균체총단백질적10%,SDS-PAGE급Western blot분석현시,기상대분자질량위39 000 KD,순화후적6xHis EID3순도가체92%.통과RT-PCR분석발현,EID3기인재43례대장암전대세포주중유39례양성,양성솔위90.7%.재정상조직중,제고환조직불표체혹유겁저수평전록외,여균불표체.결론 EID3기인극륭、표체급순화적성공,위기금후적종류진단화종류다태역묘치료연구전정료기출.EID3 mRNA표체검측용우진단대장암,가능구유고특이성화고민감성적특점.EID3단백재대장암환자중능구유도궤체적항체면역응답,가능성위일개신적대장암상관성항원분자,기용우진단대장암적가행성,유대진일보심입연구.
