p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用
p38사렬원격활단백격매기인중조만병독재체적구건급기재건립인전렬선암은정세포주중적응용
Construction of a recombinant lentiviral vector of p38 MAPK and establishment of a human prostatic carcinoma cell line stably expressingp38 MAPK
  • 万方数据
    南方医科大学学报 남방의과대학학보
    JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
    2012年 3期 317-321 ,共5页

    荆玉明%罗杰%张艳玲%陈三三%万沛%颜仁和%王宏昌%陈白虹%谭万龙%李红卫

    형옥명%라걸%장염령%진삼삼%만패%안인화%왕굉창%진백홍%담만룡%리홍위

    p38丝裂原激活蛋白激酶%稳定细胞株%前列腺癌%慢病毒 p38絲裂原激活蛋白激酶%穩定細胞株%前列腺癌%慢病毒
    p38사렬원격활단백격매%은정세포주%전렬선암%만병독
    目的 构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株.方法 采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线.结果 经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7× 106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组.结论 成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖.
    목적 구건p38사렬원격활단백격매기인(MAPK)중조만병독재체병건립표체외원성p38기인적인전렬선암은정세포주.방법 채용한제성내절매매절、T4 DNA련접매련접등방법,장EGFP/p38융합기인삽입만병독재체pTYF-EF1α-IRES-EGFP중,구건계동자EF1α조공적EGFP/p38공표체만병독재체pTYF-EF1α-EGFP/p38,경매절감정후,이용만병독삼질립계통,통과지질체법전염포장세포HEK 293T세포,수집병독상청후전도인전렬선암DU145세포주,경유한희석법사선중조EGFP/p38은정세포주,용Western blotting검측세포총p38적표체,용계수법회제세포적생장곡선.결과 경매절감정,성공구건EGFP/p38중조만병독재체,병포장만병독,검측병독현액적적도위4.7× 106 TU/ml,이용차병독현액감염DU145세포,성공사선도EGFP/p38은정표체세포주,Western blotting현시해세포주능은정표체외원성EGFP/p38융합단백,저충과표체p38적세포주적생장속도명현저우대조조.결론 성공구건p38 MAPK중조만병독재체병건립료표체외원성p38 MAPK기인적은정세포주EGFP/p38-DU145,세포내p38과표체능구억제DU145세포적증식.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문