器官移植
器官移植
기관이식
OGRAN TRANSPLANTATION
2012年
4期
230-237
,共8页
谭雷%胡昆鹏%徐丽南%姚志成%徐见亮%林楠%卢逸%许瑞云
譚雷%鬍昆鵬%徐麗南%姚誌成%徐見亮%林楠%盧逸%許瑞雲
담뢰%호곤붕%서려남%요지성%서견량%림남%로일%허서운
骨髓间质干细胞培养上清液%肝细胞生长因子%肝细胞%肝纤维化
骨髓間質榦細胞培養上清液%肝細胞生長因子%肝細胞%肝纖維化
골수간질간세포배양상청액%간세포생장인자%간세포%간섬유화
目的 探讨骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)培养上清液对肝细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨BMSC治疗肝纤维化的旁分泌机制.方法 采用密度梯度离心及贴壁细胞分离相结合提取BMSC.培养48 h的BMSC细胞培养上清液按BMSC不同处理(培养)时间和含量两种方法 建组.不同处理时间建组:取培养48 h BMSC上清液处理肝细胞(完全培养),分为处理24 h、48 h、72 h组,对照组为1640培养基处理24 h的肝细胞.不同含量BMSC建组:实验1组为完全BMSC培养上清液(含肝细胞的6孔板中每孔加入BMSC上清液2 ml)处理肝细胞;实验2组为部分BMSC培养上清液(每孔加BMSC上清液1 ml + 1640培养基1 ml)处理肝细胞;对照组为完全细胞培养基(每孔加1640培养基2 ml)处理肝细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测BMSC旁分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)情况及培养时间对其的影响;用流式细胞仪观察肝细胞细胞分期和检测凋亡细胞数;用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测样本上清液中白蛋白的表达.结果 BMSC分泌HGF,其含量变化具有时间依赖性.加入BMSC培养上清液后,与对照组相比,实验1组中的培养上清液可以明显促进肝细胞增殖、抑制其凋亡,并随着处理时间的延长而增加(处理72 h＞处理48 h＞处理24 h,均为P ＜ 0.05);实验组(1组、2组)的白蛋白分泌较对照组上调,且随着处理时间的延长白蛋白含量增加.结论 BMSC有可能通过分泌HGF促进肝细胞增殖、抑制凋亡,促进白蛋白分泌,从而抑制肝脏纤维化.
目的 探討骨髓間質榦細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)培養上清液對肝細胞增殖、凋亡的影響,初步探討BMSC治療肝纖維化的徬分泌機製.方法 採用密度梯度離心及貼壁細胞分離相結閤提取BMSC.培養48 h的BMSC細胞培養上清液按BMSC不同處理(培養)時間和含量兩種方法 建組.不同處理時間建組:取培養48 h BMSC上清液處理肝細胞(完全培養),分為處理24 h、48 h、72 h組,對照組為1640培養基處理24 h的肝細胞.不同含量BMSC建組:實驗1組為完全BMSC培養上清液(含肝細胞的6孔闆中每孔加入BMSC上清液2 ml)處理肝細胞;實驗2組為部分BMSC培養上清液(每孔加BMSC上清液1 ml + 1640培養基1 ml)處理肝細胞;對照組為完全細胞培養基(每孔加1640培養基2 ml)處理肝細胞.用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒檢測BMSC徬分泌肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)情況及培養時間對其的影響;用流式細胞儀觀察肝細胞細胞分期和檢測凋亡細胞數;用蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測樣本上清液中白蛋白的錶達.結果 BMSC分泌HGF,其含量變化具有時間依賴性.加入BMSC培養上清液後,與對照組相比,實驗1組中的培養上清液可以明顯促進肝細胞增殖、抑製其凋亡,併隨著處理時間的延長而增加(處理72 h＞處理48 h＞處理24 h,均為P ＜ 0.05);實驗組(1組、2組)的白蛋白分泌較對照組上調,且隨著處理時間的延長白蛋白含量增加.結論 BMSC有可能通過分泌HGF促進肝細胞增殖、抑製凋亡,促進白蛋白分泌,從而抑製肝髒纖維化.
목적 탐토골수간질간세포(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)배양상청액대간세포증식、조망적영향,초보탐토BMSC치료간섬유화적방분비궤제.방법 채용밀도제도리심급첩벽세포분리상결합제취BMSC.배양48 h적BMSC세포배양상청액안BMSC불동처리(배양)시간화함량량충방법 건조.불동처리시간건조:취배양48 h BMSC상청액처리간세포(완전배양),분위처리24 h、48 h、72 h조,대조조위1640배양기처리24 h적간세포.불동함량BMSC건조:실험1조위완전BMSC배양상청액(함간세포적6공판중매공가입BMSC상청액2 ml)처리간세포;실험2조위부분BMSC배양상청액(매공가BMSC상청액1 ml + 1640배양기1 ml)처리간세포;대조조위완전세포배양기(매공가1640배양기2 ml)처리간세포.용매련면역흡부시험(ELISA)시제합검측BMSC방분비간세포생장인자(hepatocyte growth factor,HGF)정황급배양시간대기적영향;용류식세포의관찰간세포세포분기화검측조망세포수;용단백면역인적법(Western-blot)검측양본상청액중백단백적표체.결과 BMSC분비HGF,기함량변화구유시간의뢰성.가입BMSC배양상청액후,여대조조상비,실험1조중적배양상청액가이명현촉진간세포증식、억제기조망,병수착처리시간적연장이증가(처리72 h＞처리48 h＞처리24 h,균위P ＜ 0.05);실험조(1조、2조)적백단백분비교대조조상조,차수착처리시간적연장백단백함량증가.결론 BMSC유가능통과분비HGF촉진간세포증식、억제조망,촉진백단백분비,종이억제간장섬유화.
