西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
1期
22-26
,共5页
王翔%胡治平%周为军%汤建光%卢伟%唐湘祁
王翔%鬍治平%週為軍%湯建光%盧偉%唐湘祁
왕상%호치평%주위군%탕건광%로위%당상기
RNAi%转化生长因子-β1%质粒载体
RNAi%轉化生長因子-β1%質粒載體
RNAi%전화생장인자-β1%질립재체
目的 构建人转化生长因子-β1(TGFβ1)基因RNAi质粒载体.方法 根据人TGFβ1 mRNA序列选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pRNA-U6.2/Lenti质粒并分别命名为pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2、pRNA-U6.2/Lenti-3、pRNA-U6.2/Lenti-4.酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染Hela细胞,运用RT-PCR和ELISA检测TGFβ1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 酶切和测序证实目的 寡核苷酸片段已被准确克隆到pRNA-U6.2/Lenti质粒;与对照组相比,pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2转染Hela细胞后,TGFβ1 mRNA水平及蛋白水平的表达量均受到明显抑制;其中TGFβ1蛋白水平在pRNA-U6.2/Lenti-1组下降79.2%,在pRNA-U6.2/Lenti-2组下降53.7%,统计有显著性差异(P＜0.01).结论 成功构建了人TGFβ1基因RNAi质粒载体,对于TGFβ1高表达疾病的基因治疗奠定了基础.
目的 構建人轉化生長因子-β1(TGFβ1)基因RNAi質粒載體.方法 根據人TGFβ1 mRNA序列選擇3箇靶序列併設計閤成相應3對寡覈苷痠序列,同時閤成1對陰性對照寡覈苷痠序列;將以上4對寡覈苷痠序列退火後連入pRNA-U6.2/Lenti質粒併分彆命名為pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2、pRNA-U6.2/Lenti-3、pRNA-U6.2/Lenti-4.酶切和測序鑒定後,將以上重組質粒轉染Hela細胞,運用RT-PCR和ELISA檢測TGFβ1 mRNA和蛋白的錶達水平.結果 酶切和測序證實目的 寡覈苷痠片段已被準確剋隆到pRNA-U6.2/Lenti質粒;與對照組相比,pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2轉染Hela細胞後,TGFβ1 mRNA水平及蛋白水平的錶達量均受到明顯抑製;其中TGFβ1蛋白水平在pRNA-U6.2/Lenti-1組下降79.2%,在pRNA-U6.2/Lenti-2組下降53.7%,統計有顯著性差異(P＜0.01).結論 成功構建瞭人TGFβ1基因RNAi質粒載體,對于TGFβ1高錶達疾病的基因治療奠定瞭基礎.
목적 구건인전화생장인자-β1(TGFβ1)기인RNAi질립재체.방법 근거인TGFβ1 mRNA서렬선택3개파서렬병설계합성상응3대과핵감산서렬,동시합성1대음성대조과핵감산서렬;장이상4대과핵감산서렬퇴화후련입pRNA-U6.2/Lenti질립병분별명명위pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2、pRNA-U6.2/Lenti-3、pRNA-U6.2/Lenti-4.매절화측서감정후,장이상중조질립전염Hela세포,운용RT-PCR화ELISA검측TGFβ1 mRNA화단백적표체수평.결과 매절화측서증실목적 과핵감산편단이피준학극륭도pRNA-U6.2/Lenti질립;여대조조상비,pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2전염Hela세포후,TGFβ1 mRNA수평급단백수평적표체량균수도명현억제;기중TGFβ1단백수평재pRNA-U6.2/Lenti-1조하강79.2%,재pRNA-U6.2/Lenti-2조하강53.7%,통계유현저성차이(P＜0.01).결론 성공구건료인TGFβ1기인RNAi질립재체,대우TGFβ1고표체질병적기인치료전정료기출.
