华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2006年
5期
561-565
,共5页
卢玮%黄磊%何惠华%朱朋成%葛晓娜%杜惠扬%敖启林%孙红蕾
盧瑋%黃磊%何惠華%硃朋成%葛曉娜%杜惠颺%敖啟林%孫紅蕾
로위%황뢰%하혜화%주붕성%갈효나%두혜양%오계림%손홍뢰
低氧%内皮细胞%平滑肌样细胞%转分化%转化生长因子β1
低氧%內皮細胞%平滑肌樣細胞%轉分化%轉化生長因子β1
저양%내피세포%평활기양세포%전분화%전화생장인자β1
目的 研究低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1(TGF-β1) 在此转分化过程中的作用.方法 将经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记)纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧(含21%O2、5%CO2、74%N2)和低氧(含1%O2、5%CO2、94%N2)条件下培养1、4、7 d,用核酸干扰法(RNAi)阻断TGF-β1的表达,用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)和Western blot分别检测各组细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达,并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin )的表达,结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化.结果 低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF-β1 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),RNAi沉默TGF-β1 基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量(P＜0.05),随着低氧培养时间的延长,肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加(P＜0.05);阻断TGF-β1表达后,平滑肌样细胞的转化率明显降低(P＜0.05).结论 肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;低氧可明显促进转分化,TGF-β1在此转分化过程中起重要作用.
目的 研究低氧條件下肺動脈內皮細胞(PAEC)嚮平滑肌樣細胞的轉分化及轉化生長因子β1(TGF-β1) 在此轉分化過程中的作用.方法 將經免疫磁珠法(用血小闆內皮細胞粘附分子1做免疫分選標記)純化後的原代肺動脈內皮細胞分彆在常氧(含21%O2、5%CO2、74%N2)和低氧(含1%O2、5%CO2、94%N2)條件下培養1、4、7 d,用覈痠榦擾法(RNAi)阻斷TGF-β1的錶達,用逆轉錄-聚閤酶鏈式反應法(RT-PCR)和Western blot分彆檢測各組細胞TGF-β1mRNA和蛋白的錶達,併用免疫細胞化學法檢測平滑肌細胞標誌蛋白α-平滑肌肌動蛋白(α-SM-actin )的錶達,結閤形態學觀察從而判定有無平滑肌樣細胞的轉分化.結果 低氧可增加肺動脈內皮細胞TGF-β1 mRNA和蛋白的錶達(P＜0.05),RNAi沉默TGF-β1 基因錶達後可明顯降低其mRNA和蛋白含量(P＜0.05),隨著低氧培養時間的延長,肺動脈內皮細胞轉分化為平滑肌樣細胞的比率逐漸增加(P＜0.05);阻斷TGF-β1錶達後,平滑肌樣細胞的轉化率明顯降低(P＜0.05).結論 肺動脈內皮中存在具有轉分化為平滑肌樣細胞潛能的細胞;低氧可明顯促進轉分化,TGF-β1在此轉分化過程中起重要作用.
목적 연구저양조건하폐동맥내피세포(PAEC)향평활기양세포적전분화급전화생장인자β1(TGF-β1) 재차전분화과정중적작용.방법 장경면역자주법(용혈소판내피세포점부분자1주면역분선표기)순화후적원대폐동맥내피세포분별재상양(함21%O2、5%CO2、74%N2)화저양(함1%O2、5%CO2、94%N2)조건하배양1、4、7 d,용핵산간우법(RNAi)조단TGF-β1적표체,용역전록-취합매련식반응법(RT-PCR)화Western blot분별검측각조세포TGF-β1mRNA화단백적표체,병용면역세포화학법검측평활기세포표지단백α-평활기기동단백(α-SM-actin )적표체,결합형태학관찰종이판정유무평활기양세포적전분화.결과 저양가증가폐동맥내피세포TGF-β1 mRNA화단백적표체(P＜0.05),RNAi침묵TGF-β1 기인표체후가명현강저기mRNA화단백함량(P＜0.05),수착저양배양시간적연장,폐동맥내피세포전분화위평활기양세포적비솔축점증가(P＜0.05);조단TGF-β1표체후,평활기양세포적전화솔명현강저(P＜0.05).결론 폐동맥내피중존재구유전분화위평활기양세포잠능적세포;저양가명현촉진전분화,TGF-β1재차전분화과정중기중요작용.
