CAJ | 학술논문

为探讨甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)小干扰RNA对人肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响及其机制,采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG 2细胞和HepG3B细胞.半定量RT-PCR检测MAT2A mRNA表达,Western印迹检测MAT2A蛋白质表达,MTT法观察MAT2A小干扰RNA对肝癌细胞生长的影响,流式细胞仪及DAPI染色检测8iRNA对肝癌细胞凋亡的影响.为探讨其作用机制,进一步检测转染后肝癌细胞MAT的活性、MAT1A mRNA表达及SAM、SAH含量.结果发现,MAT2A小干扰RNA特异性抑制人肝癌细胞MAT2A mRNA和蛋白质的表达,刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变,降低了肝癌细胞中MATⅡ活性(P＜0.05),从而诱导肝癌细胞凋亡;MAT2A小干扰RNA诱导Bel-7402细胞、HepG 2细胞、Hep 3B细胞凋亡指数分别为19.3%±2.8%、22.8%±3.5%、21.8%±4.2%,较对照组siRNA(凋亡指数为5.2%±1.9%)具有明显差异(P＜0.05).DAPI染色显示,MAT2A小干扰RNA转染组可见多个细胞核浓缩、碎裂成蓝色的小块状,染色质凝聚,形成典型的凋亡小体,而对照siRNA转染组未发现典型的凋亡小体.肝癌细胞的生长也受到抑制,MAT2A小干扰RNA转染Bel-7402细胞、HepG 2细胞、HepG3B细胞72 h后,细胞生长抑制率达高峰,分别为39.62%、41.27%、38.84%.肝癌细胞中SAM含量明显升高(P＜0.01),而SAH含量改变不明显,SAM/SAH变化伴随SAM含量变化而改变.提示靶向MAT2A基因的siRNA通过升高肝癌细胞中SAM含量,刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变,从而诱导肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞生长.
위탐토갑류안산선감전이매2A(MAT2A)소간우RNA대인간암세포생장화세포조망적영향급기궤제,채용지질체전염법장MAT2A소간우RNA질립표체재체전염인간암세포계Bel-7402세포、HepG 2세포화HepG3B세포.반정량RT-PCR검측MAT2A mRNA표체,Western인적검측MAT2A단백질표체,MTT법관찰MAT2A소간우RNA대간암세포생장적영향,류식세포의급DAPI염색검측8iRNA대간암세포조망적영향.위탐토기작용궤제,진일보검측전염후간암세포MAT적활성、MAT1A mRNA표체급SAM、SAH함량.결과발현,MAT2A소간우RNA특이성억제인간암세포MAT2A mRNA화단백질적표체,자격MAT표체유MAT2A향MAT1A전변,강저료간암세포중MATⅡ활성(P＜0.05),종이유도간암세포조망;MAT2A소간우RNA유도Bel-7402세포、HepG 2세포、Hep 3B세포조망지수분별위19.3%±2.8%、22.8%±3.5%、21.8%±4.2%,교대조조siRNA(조망지수위5.2%±1.9%)구유명현차이(P＜0.05).DAPI염색현시,MAT2A소간우RNA전염조가견다개세포핵농축、쇄렬성람색적소괴상,염색질응취,형성전형적조망소체,이대조siRNA전염조미발현전형적조망소체.간암세포적생장야수도억제,MAT2A소간우RNA전염Bel-7402세포、HepG 2세포、HepG3B세포72 h후,세포생장억제솔체고봉,분별위39.62%、41.27%、38.84%.간암세포중SAM함량명현승고(P＜0.01),이SAH함량개변불명현,SAM/SAH변화반수SAM함량변화이개변.제시파향MAT2A기인적siRNA통과승고간암세포중SAM함량,자격MAT표체유MAT2A향MAT1A전변,종이유도간암세포조망,억제간암세포생장.