第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2006年
10期
1076-1080
,共5页
张晔%朱晓燕%刘宇健%卢建
張曄%硃曉燕%劉宇健%盧建
장엽%주효연%류우건%로건
RNA干扰%骨肉瘤%受体,维生素D3
RNA榦擾%骨肉瘤%受體,維生素D3
RNA간우%골육류%수체,유생소D3
目的:构建由载体介导的抑制人维生素D3受体(VDR)表达的RNA干扰载体,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对VDR表达及功能的影响.方法:通过在线筛选设计了两段针对人VDR的RNAi序列,并与载体pSilencer-2.1-U6连接,获得了表达载体pSilencer-2.1-U6-VDR1与pSilencer-2.1-U6-VDR2.利用脂质体转染法分别转入人骨肉瘤细胞系HOS-8603细胞中,通过Western 印迹法检测其对内源性VDR蛋白表达、对1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]激活PKC作用的影响,利用细胞计数和MTT的方法检测其对1,25(OH)2D3抑制HOS-8603细胞增殖作用的影响.结果:在分别转染pSilencer-2.1-U6-VDR1/2的HOS-8603细胞中,与对照细胞比较,内源性VDR蛋白的表达、1,25(OH)2D3对细胞的增殖抑制作用以及1,25(OH)2D3快速诱导PKC磷酸化的作用均有显著降低.结论:构建的表达载体pSilencer 2.1-U6-VDR1与pSilencer 2.1-U6-VDR2均能在细胞水平显著抑制内源性VDR基因的表达,并能有效阻断一些由VDR介导的1,25(OH)2D3生物学作用,为进一步研究VDR与维生素D3的功能提供了一个有用工具.
目的:構建由載體介導的抑製人維生素D3受體(VDR)錶達的RNA榦擾載體,併在人骨肉瘤細胞中初步研究其對VDR錶達及功能的影響.方法:通過在線篩選設計瞭兩段針對人VDR的RNAi序列,併與載體pSilencer-2.1-U6連接,穫得瞭錶達載體pSilencer-2.1-U6-VDR1與pSilencer-2.1-U6-VDR2.利用脂質體轉染法分彆轉入人骨肉瘤細胞繫HOS-8603細胞中,通過Western 印跡法檢測其對內源性VDR蛋白錶達、對1,25-二羥維生素D3[1,25(OH)2D3]激活PKC作用的影響,利用細胞計數和MTT的方法檢測其對1,25(OH)2D3抑製HOS-8603細胞增殖作用的影響.結果:在分彆轉染pSilencer-2.1-U6-VDR1/2的HOS-8603細胞中,與對照細胞比較,內源性VDR蛋白的錶達、1,25(OH)2D3對細胞的增殖抑製作用以及1,25(OH)2D3快速誘導PKC燐痠化的作用均有顯著降低.結論:構建的錶達載體pSilencer 2.1-U6-VDR1與pSilencer 2.1-U6-VDR2均能在細胞水平顯著抑製內源性VDR基因的錶達,併能有效阻斷一些由VDR介導的1,25(OH)2D3生物學作用,為進一步研究VDR與維生素D3的功能提供瞭一箇有用工具.
목적:구건유재체개도적억제인유생소D3수체(VDR)표체적RNA간우재체,병재인골육류세포중초보연구기대VDR표체급공능적영향.방법:통과재선사선설계료량단침대인VDR적RNAi서렬,병여재체pSilencer-2.1-U6련접,획득료표체재체pSilencer-2.1-U6-VDR1여pSilencer-2.1-U6-VDR2.이용지질체전염법분별전입인골육류세포계HOS-8603세포중,통과Western 인적법검측기대내원성VDR단백표체、대1,25-이간유생소D3[1,25(OH)2D3]격활PKC작용적영향,이용세포계수화MTT적방법검측기대1,25(OH)2D3억제HOS-8603세포증식작용적영향.결과:재분별전염pSilencer-2.1-U6-VDR1/2적HOS-8603세포중,여대조세포비교,내원성VDR단백적표체、1,25(OH)2D3대세포적증식억제작용이급1,25(OH)2D3쾌속유도PKC린산화적작용균유현저강저.결론:구건적표체재체pSilencer 2.1-U6-VDR1여pSilencer 2.1-U6-VDR2균능재세포수평현저억제내원성VDR기인적표체,병능유효조단일사유VDR개도적1,25(OH)2D3생물학작용,위진일보연구VDR여유생소D3적공능제공료일개유용공구.