酵母双杂交法对HBV表面抗原主蛋白候选结合蛋白的筛选
효모쌍잡교법대HBV표면항원주단백후선결합단백적사선
Screening of hepatocyte proteins interacting with the small surface protein of hepatitis B virus using yeast two hybrid technique
  • 万方数据
    世界华人消化杂志 세계화인소화잡지
    WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
    2008年 13期 1378-1382 ,共5页

    周飞%任建林%卢雅丕%陈美娅%陈建民%刘明%施华秀%张波%董菁

    주비%임건림%로아비%진미아%진건민%류명%시화수%장파%동정

    乙型肝炎病毒%酵母双杂交技术%主蛋白%结合蛋白%聚合酶链式反应 乙型肝炎病毒%酵母雙雜交技術%主蛋白%結閤蛋白%聚閤酶鏈式反應
    을형간염병독%효모쌍잡교기술%주단백%결합단백%취합매련식반응
    目的:自肝细胞cDNA文库中筛选与HBV主蛋白(SHBs)相互作用的蛋白基因,探讨主蛋白的生物学功能.方法:利用PCR扩增S主蛋白基因,定向克隆技术将靶基因克隆到pDEST32构建出S主蛋白的诱饵质粒:Western blot方法验证转化诱饵质粒的酵母细胞表达SHBs:将诱饵质粒与人肝cDNA文库猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞,在营养缺陷型培养基和X-gal上进行三重筛选阳性菌落,提取阳性酵母茵落的猎物质粒进行DNA测序;利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析.结果:构建S主蛋白及肝文库酵母细胞表达载体,进行酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,筛选出既能在缺陷培养基也能在X-gal的检测下变成蓝色的真阳性菌落3个,分别为核糖体蛋白L3、微管蛋白α-1a和α-2巨球蛋白.结论:用酵母双杂交技术筛选出3个与SHBs相互作用的肝细胞结合蛋白编码基因,提示SHBs可能参与到肝细胞内部的多种生物学反应.
    목적:자간세포cDNA문고중사선여HBV주단백(SHBs)상호작용적단백기인,탐토주단백적생물학공능.방법:이용PCR확증S주단백기인,정향극륭기술장파기인극륭도pDEST32구건출S주단백적유이질립:Western blot방법험증전화유이질립적효모세포표체SHBs:장유이질립여인간cDNA문고작물질립공동전화MaV203효모세포,재영양결함형배양기화X-gal상진행삼중사선양성균락,제취양성효모인락적작물질립진행DNA측서;이용핵감산수거고급생물신식학기술,대우사선결과진행분석.결과:구건S주단백급간문고효모세포표체재체,진행효모쌍잡교계통사선인간세포cDNA문고,사선출기능재결함배양기야능재X-gal적검측하변성람색적진양성균락3개,분별위핵당체단백L3、미관단백α-1a화α-2거구단백.결론:용효모쌍잡교기술사선출3개여SHBs상호작용적간세포결합단백편마기인,제시SHBs가능삼여도간세포내부적다충생물학반응.
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