法医学杂志
法醫學雜誌
법의학잡지
JOURNAL OF FORENSIC MEDICINE
2008年
3期
189-193
,共5页
王瑞恒%刘利民%赵金玲%孙学科%孙琳琳%周刚
王瑞恆%劉利民%趙金玲%孫學科%孫琳琳%週剛
왕서항%류이민%조금령%손학과%손림림%주강
法医生物学%单核苷酸多态性%等位基因特异性PCR%复合扩增
法醫生物學%單覈苷痠多態性%等位基因特異性PCR%複閤擴增
법의생물학%단핵감산다태성%등위기인특이성PCR%복합확증
目的 建立一种新方法,对多个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点进行分型.方法 基于等位基因特异性PCR原理,采用荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术,根据PCR片段长度差异进行分型.选择SNP位点共11个,每个SNP位点设计两条长度不同、3' 末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时为了增加特异性,在两条等位基因上游引物的3' 末端第3或第4位碱基人为引入错配.在距离上游引物100～300bp范围内的合适位置,设计下游共用引物,并进行荧光标记.所有位点经过复合扩增后.PCR产物经ABI PrismTM310型遗传分析仪电泳分离,确定每个SNP的基因型.结果 每个SNP位点纯合子为单一产物峰.杂合子则为长度不同的两个产物峰.不同的SNP位点扩增产物长度不同.根据产物长度和产物峰的数量进行SNP分型,一次完成11个SNP位点分型,其结果与直接测序完全一致.结论 荧光标记复合扩增片段长度差异等位基因特异性PCR法是一种简单快速而有效的SNP分型新方法.
目的 建立一種新方法,對多箇單覈苷痠多態性(single nucleotide polymorphism, SNP)位點進行分型.方法 基于等位基因特異性PCR原理,採用熒光標記複閤擴增和毛細管電泳技術,根據PCR片段長度差異進行分型.選擇SNP位點共11箇,每箇SNP位點設計兩條長度不同、3' 末耑分彆與SNP兩箇等位基因堿基配對的上遊引物,同時為瞭增加特異性,在兩條等位基因上遊引物的3' 末耑第3或第4位堿基人為引入錯配.在距離上遊引物100～300bp範圍內的閤適位置,設計下遊共用引物,併進行熒光標記.所有位點經過複閤擴增後.PCR產物經ABI PrismTM310型遺傳分析儀電泳分離,確定每箇SNP的基因型.結果 每箇SNP位點純閤子為單一產物峰.雜閤子則為長度不同的兩箇產物峰.不同的SNP位點擴增產物長度不同.根據產物長度和產物峰的數量進行SNP分型,一次完成11箇SNP位點分型,其結果與直接測序完全一緻.結論 熒光標記複閤擴增片段長度差異等位基因特異性PCR法是一種簡單快速而有效的SNP分型新方法.
목적 건립일충신방법,대다개단핵감산다태성(single nucleotide polymorphism, SNP)위점진행분형.방법 기우등위기인특이성PCR원리,채용형광표기복합확증화모세관전영기술,근거PCR편단장도차이진행분형.선택SNP위점공11개,매개SNP위점설계량조장도불동、3' 말단분별여SNP량개등위기인감기배대적상유인물,동시위료증가특이성,재량조등위기인상유인물적3' 말단제3혹제4위감기인위인입착배.재거리상유인물100～300bp범위내적합괄위치,설계하유공용인물,병진행형광표기.소유위점경과복합확증후.PCR산물경ABI PrismTM310형유전분석의전영분리,학정매개SNP적기인형.결과 매개SNP위점순합자위단일산물봉.잡합자칙위장도불동적량개산물봉.불동적SNP위점확증산물장도불동.근거산물장도화산물봉적수량진행SNP분형,일차완성11개SNP위점분형,기결과여직접측서완전일치.결론 형광표기복합확증편단장도차이등위기인특이성PCR법시일충간단쾌속이유효적SNP분형신방법.
