中华实验和临床感染病杂志（电子版）
中華實驗和臨床感染病雜誌（電子版）
중화실험화림상감염병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2009年
2期
5-8
,共4页
汪明珊%颜学兵%周林福%侯晓丽%李杨霞%温晓芳%姜云水%陈智
汪明珊%顏學兵%週林福%侯曉麗%李楊霞%溫曉芳%薑雲水%陳智
왕명산%안학병%주림복%후효려%리양하%온효방%강운수%진지
丙型肝炎病毒%核心蛋白%pTrc-CKS%质粒构建
丙型肝炎病毒%覈心蛋白%pTrc-CKS%質粒構建
병형간염병독%핵심단백%pTrc-CKS%질립구건
目的 为研究与不同准种HCV 核心蛋白(Core)相互作用的细胞蛋白质组,构建并表达基因1b型的不同准种Core的原核表达质粒pTrc-CKS.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增并获得等长度片段的基因1b型的不同准种株丙型肝炎病毒(HCV)Core基因,氨基酸(aa)长度分别为癌中心株(T):1～172 aa、癌旁株(NT):1～172 aa及C191(HCV-J6):1～172 aa.扩增产物用Bam HⅠ及Eco RⅠ双酶切后插入到原核表达质粒pTrc-CKS中.阳性克隆转化到大肠埃希菌Top 10F'中,异丙基-β-D-S-代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得融合蛋白CKS-Core-His,经Ni2+10F'柱纯化并经Western blot验证.结果 PCR及双酶切验证表明3个基因为1b型的不同准种Core基因成功构建到原核质粒pTrc-CKS中,体外诱导并获得了相应的融合蛋白.结论 构建不同准种Core基因的原核表达质粒获得成功,体外诱导表达并纯化获得了CKS-Core-His融合蛋白,为后续研究与Core相互作用的细胞蛋白质组奠定了基础.
目的 為研究與不同準種HCV 覈心蛋白(Core)相互作用的細胞蛋白質組,構建併錶達基因1b型的不同準種Core的原覈錶達質粒pTrc-CKS.方法 用聚閤酶鏈反應(PCR)擴增併穫得等長度片段的基因1b型的不同準種株丙型肝炎病毒(HCV)Core基因,氨基痠(aa)長度分彆為癌中心株(T):1～172 aa、癌徬株(NT):1～172 aa及C191(HCV-J6):1～172 aa.擴增產物用Bam HⅠ及Eco RⅠ雙酶切後插入到原覈錶達質粒pTrc-CKS中.暘性剋隆轉化到大腸埃希菌Top 10F'中,異丙基-β-D-S-代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達穫得融閤蛋白CKS-Core-His,經Ni2+10F'柱純化併經Western blot驗證.結果 PCR及雙酶切驗證錶明3箇基因為1b型的不同準種Core基因成功構建到原覈質粒pTrc-CKS中,體外誘導併穫得瞭相應的融閤蛋白.結論 構建不同準種Core基因的原覈錶達質粒穫得成功,體外誘導錶達併純化穫得瞭CKS-Core-His融閤蛋白,為後續研究與Core相互作用的細胞蛋白質組奠定瞭基礎.
목적 위연구여불동준충HCV 핵심단백(Core)상호작용적세포단백질조,구건병표체기인1b형적불동준충Core적원핵표체질립pTrc-CKS.방법 용취합매련반응(PCR)확증병획득등장도편단적기인1b형적불동준충주병형간염병독(HCV)Core기인,안기산(aa)장도분별위암중심주(T):1～172 aa、암방주(NT):1～172 aa급C191(HCV-J6):1～172 aa.확증산물용Bam HⅠ급Eco RⅠ쌍매절후삽입도원핵표체질립pTrc-CKS중.양성극륭전화도대장애희균Top 10F'중,이병기-β-D-S-대반유당감(IPTG)유도표체획득융합단백CKS-Core-His,경Ni2+10F'주순화병경Western blot험증.결과 PCR급쌍매절험증표명3개기인위1b형적불동준충Core기인성공구건도원핵질립pTrc-CKS중,체외유도병획득료상응적융합단백.결론 구건불동준충Core기인적원핵표체질립획득성공,체외유도표체병순화획득료CKS-Core-His융합단백,위후속연구여Core상호작용적세포단백질조전정료기출.
