南通大学学报(医学版)
南通大學學報(醫學版)
남통대학학보(의학판)
JOURNAL OF NANTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
2期
79-82,85,封2
,共6页
胡博%林丹丹%张胤晟%包光明%单琳%赵昀%刘海燕
鬍博%林丹丹%張胤晟%包光明%單琳%趙昀%劉海燕
호박%림단단%장윤성%포광명%단림%조윤%류해연
白细胞介素15%慢病毒载体%小鼠
白細胞介素15%慢病毒載體%小鼠
백세포개소15%만병독재체%소서
目的:克隆小鼠白细胞介素15(IL-15)基因,并构建可表达小鼠IL-15基因的重组慢病毒.方法:根据小鼠IL-15基因序列以及慢病毒穿梭载体相应的酶切位点设计合成PCR引物;提取小鼠脾脏总RNA,逆转录PCR扩增小鼠IL-15基因的编码区;克隆小鼠IL-15基因的编码区,并进行基因测序;构建含有IL-15基因的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起感染293T细胞;获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG,Western Blot检测IL-15基因在MEG细胞中的表达.结果:含有小鼠IL-15基因编码区的慢病毒穿梭质粒构建成功,基因测序结果完全正确;含有小鼠IL-15基因的慢病毒载体包装成功;所得病毒上清可成功感染MEG细胞,流式细胞术检测阳性率可达98%;Western Blot结果证明小鼠IL-15基因在MEG细胞中正常表达.结论:成功扩增、克隆了小鼠IL-15基因,并建立其慢病毒表达系统.从而为后续的基础及应用研究工作奠定了基础.
目的:剋隆小鼠白細胞介素15(IL-15)基因,併構建可錶達小鼠IL-15基因的重組慢病毒.方法:根據小鼠IL-15基因序列以及慢病毒穿梭載體相應的酶切位點設計閤成PCR引物;提取小鼠脾髒總RNA,逆轉錄PCR擴增小鼠IL-15基因的編碼區;剋隆小鼠IL-15基因的編碼區,併進行基因測序;構建含有IL-15基因的慢病毒穿梭質粒,併與其它包裝質粒一起感染293T細胞;穫得病毒顆粒併感染人慢性髓繫白血病細胞MEG,Western Blot檢測IL-15基因在MEG細胞中的錶達.結果:含有小鼠IL-15基因編碼區的慢病毒穿梭質粒構建成功,基因測序結果完全正確;含有小鼠IL-15基因的慢病毒載體包裝成功;所得病毒上清可成功感染MEG細胞,流式細胞術檢測暘性率可達98%;Western Blot結果證明小鼠IL-15基因在MEG細胞中正常錶達.結論:成功擴增、剋隆瞭小鼠IL-15基因,併建立其慢病毒錶達繫統.從而為後續的基礎及應用研究工作奠定瞭基礎.
목적:극륭소서백세포개소15(IL-15)기인,병구건가표체소서IL-15기인적중조만병독.방법:근거소서IL-15기인서렬이급만병독천사재체상응적매절위점설계합성PCR인물;제취소서비장총RNA,역전록PCR확증소서IL-15기인적편마구;극륭소서IL-15기인적편마구,병진행기인측서;구건함유IL-15기인적만병독천사질립,병여기타포장질립일기감염293T세포;획득병독과립병감염인만성수계백혈병세포MEG,Western Blot검측IL-15기인재MEG세포중적표체.결과:함유소서IL-15기인편마구적만병독천사질립구건성공,기인측서결과완전정학;함유소서IL-15기인적만병독재체포장성공;소득병독상청가성공감염MEG세포,류식세포술검측양성솔가체98%;Western Blot결과증명소서IL-15기인재MEG세포중정상표체.결론:성공확증、극륭료소서IL-15기인,병건립기만병독표체계통.종이위후속적기출급응용연구공작전정료기출.
