湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2011年
7期
1488-1493
,共6页
付正%张华山%曾小英%熊海容
付正%張華山%曾小英%熊海容
부정%장화산%증소영%웅해용
嗜热真菌%重叠延伸PCR%定点突变%木聚糖酶
嗜熱真菌%重疊延伸PCR%定點突變%木聚糖酶
기열진균%중첩연신PCR%정점돌변%목취당매
为了进一步提高嗜热真菌(Thermorayces lanuginosus DSM10635)本已较耐热的木聚糖酶1YNA的热稳定性.利用重叠延伸PCR技术从嗜热真菌基因组DNA中扩增获得了木聚糖酶1YNA的基因xyl,将其插入到大肠杆菌表达栽体pET-22b(+)中,构建了重组表达质粒pET-22b(+)-xyl.该质粒转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)后获得了能成功表达的工程菌.工程菌表达木聚糖酶1YNA的最适温度为65℃,最适pH值为6.0.其在75℃,pH值为6.5的条件下失活处理30min后还残存有30%的酶活,与嗜热真菌生产的木聚糖酶特性相近.在对该木聚糖酶的N端氨基酸序列进行定点突变后发现,T4A、T4G、T4R均对该木聚糖酶的热稳定性无显著影响,其中T4G突变体的耐热性有变弱的趋势.
為瞭進一步提高嗜熱真菌(Thermorayces lanuginosus DSM10635)本已較耐熱的木聚糖酶1YNA的熱穩定性.利用重疊延伸PCR技術從嗜熱真菌基因組DNA中擴增穫得瞭木聚糖酶1YNA的基因xyl,將其插入到大腸桿菌錶達栽體pET-22b(+)中,構建瞭重組錶達質粒pET-22b(+)-xyl.該質粒轉化到錶達宿主大腸桿菌BL21(DE3)後穫得瞭能成功錶達的工程菌.工程菌錶達木聚糖酶1YNA的最適溫度為65℃,最適pH值為6.0.其在75℃,pH值為6.5的條件下失活處理30min後還殘存有30%的酶活,與嗜熱真菌生產的木聚糖酶特性相近.在對該木聚糖酶的N耑氨基痠序列進行定點突變後髮現,T4A、T4G、T4R均對該木聚糖酶的熱穩定性無顯著影響,其中T4G突變體的耐熱性有變弱的趨勢.
위료진일보제고기열진균(Thermorayces lanuginosus DSM10635)본이교내열적목취당매1YNA적열은정성.이용중첩연신PCR기술종기열진균기인조DNA중확증획득료목취당매1YNA적기인xyl,장기삽입도대장간균표체재체pET-22b(+)중,구건료중조표체질립pET-22b(+)-xyl.해질립전화도표체숙주대장간균BL21(DE3)후획득료능성공표체적공정균.공정균표체목취당매1YNA적최괄온도위65℃,최괄pH치위6.0.기재75℃,pH치위6.5적조건하실활처리30min후환잔존유30%적매활,여기열진균생산적목취당매특성상근.재대해목취당매적N단안기산서렬진행정점돌변후발현,T4A、T4G、T4R균대해목취당매적열은정성무현저영향,기중T4G돌변체적내열성유변약적추세.
