CAJ | 학술논문

目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎问盘生物活性的影响.方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32).B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中,在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘,通过溴化吡啶/二乙酸荧光素(EB/FDA)荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率,以二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测髓核组织蛋白多糖(PG)含量,以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量;对照组取标本后直接进行以上检测.结果:B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降,2m～12m保存期间,B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平,但均较2w时下降;B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别(p>0.05),在保存6m及12m时C组明显高于B组(P<0.05);C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明最高B组(P<0.05).B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低,在保存2m～12m期间,C组PG含量均高于B组(p<0.05).B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低.但两组问未见明显差异(P>0.05).结论:利用-196℃保存椎间盘组织,无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存;-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平,能满足同种异体椎间盘移植的要求.
목적:탐토심저온보존온도급보존시간대추문반생물활성적영향.방법:취1세령Beagle견신선추간반72개,분위대조조(A조,n=8)、-80℃보존조(B조,n=32)화-196℃보존조(C조,n=32).B화C조재냉동보존액중분별보존우-80℃저온빙상급-196℃액담중,재보존2w、2m、6m급12m시매조매개시간점취8개추간반,통과추화필정/이을산형광소(EB/FDA)형광염색법검측추간반조직중불동부위적세포존활솔,이이갑기아갑람(DMMB)염색법검측수핵조직단백다당(PG)함량,이간포안산검측법측정섬유배조직중적총효원함량;대조조취표본후직접진행이상검측.결과:B화C조추간반재보존지2w시각부위세포존활솔교A조명현하강,2m～12m보존기간,B、C량조추간반각부위적세포존활솔균유지재상대항정적수평,단균교2w시하강;B조급C조외층섬유배세포존활솔재보존2w화2m시무명현차별(p>0.05),재보존6m급12m시C조명현고우B조(P<0.05);C조내층섬유배급수핵조직세포존활솔재각검측시간점균명최고B조(P<0.05).B、C량조재각검측시간점PG함량균교A조명현강저,재보존2m～12m기간,C조PG함량균고우B조(p<0.05).B、C량조총효원단백함량재보존기간수시간축점강저.단량조문미견명현차이(P>0.05).결론:이용-196℃보존추간반조직,무론재세포총적존활솔급PG함량상균우우-80℃보존;-196℃보존12개월시추간반세포존활솔급PG함량균유지재상대은정적수평,능만족동충이체추간반이식적요구.