华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2011年
3期
306-309,313
,共5页
黄旭%赵鹃%毛英杰%谷志远
黃旭%趙鵑%毛英傑%穀誌遠
황욱%조견%모영걸%곡지원
Dishevelled 2%表达质粒%RAW264.7细胞%破骨细胞
Dishevelled 2%錶達質粒%RAW264.7細胞%破骨細胞
Dishevelled 2%표체질립%RAW264.7세포%파골세포
目的 构建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)表达质粒,并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础.方法 根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物,提取RAW264.7细胞总RNA,以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框(ORF),并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上,酶切电泳,测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒.用脂质体介导瞬时转染RAW264.7细胞,通过荧光显微镜观察转染效果,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况.结果 成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体,酶切电泳和测序结果 与目的 基因相符;转染RAW264.7细胞后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达.结论 成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2,瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平.
目的 構建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)錶達質粒,併檢測其轉染小鼠破骨前體細胞RAW264.7後的錶達,為進一步研究Dvl2在破骨細胞分化和骨重建中的作用、篩選調節骨重建潛在靶點奠定基礎.方法 根據GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列設計兩條特異性引物,提取RAW264.7細胞總RNA,以RT-PCR穫得Dvl2的開放閱讀框(ORF),併將其剋隆到真覈錶達質粒pEZ-M29上,酶切電泳,測序鑒定構建的pEZ-M29/Dvl2質粒.用脂質體介導瞬時轉染RAW264.7細胞,通過熒光顯微鏡觀察轉染效果,實時定量RT-PCR檢測Dvl2基因錶達情況.結果 成功構建pEZ-M29/Dvl2錶達載體,酶切電泳和測序結果 與目的 基因相符;轉染RAW264.7細胞後48 h,熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白錶達;實時定量RT-PCR可見實驗組Dvl2基因較對照組彊烈過錶達.結論 成功構建小鼠Dvl2真覈錶達質粒pEZ-M29/Dvl2,瞬時轉染小鼠破骨前體細胞RAW264.7可顯著提高Dvl2的mRNA水平.
목적 구건소서Dishevelled 2(Dvl2)표체질립,병검측기전염소서파골전체세포RAW264.7후적표체,위진일보연구Dvl2재파골세포분화화골중건중적작용、사선조절골중건잠재파점전정기출.방법 근거GenBank소서Dvl2 cDNA서렬설계량조특이성인물,제취RAW264.7세포총RNA,이RT-PCR획득Dvl2적개방열독광(ORF),병장기극륭도진핵표체질립pEZ-M29상,매절전영,측서감정구건적pEZ-M29/Dvl2질립.용지질체개도순시전염RAW264.7세포,통과형광현미경관찰전염효과,실시정량RT-PCR검측Dvl2기인표체정황.결과 성공구건pEZ-M29/Dvl2표체재체,매절전영화측서결과 여목적 기인상부;전염RAW264.7세포후48 h,형광현미경하가견록색형광단백표체;실시정량RT-PCR가견실험조Dvl2기인교대조조강렬과표체.결론 성공구건소서Dvl2진핵표체질립pEZ-M29/Dvl2,순시전염소서파골전체세포RAW264.7가현저제고Dvl2적mRNA수평.
