旋毛虫A200711蛋白的原核表达、纯化及其对H7402细胞增殖的影响
선모충A200711단백적원핵표체、순화급기대H7402세포증식적영향
Effect on proliferation of H7402 cell treated with A200711 protein from Trichinella spiralis by prokaryotic expression and purification
  • 万方数据
    中国实验诊断学 중국실험진단학
    CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
    2012年 2期 194-197 ,共4页

    李慧萍%刘学%张馨月%郭恒%赵丽晶%刘攀%孙树民%褚丽新%刘娟%刘明远%王学林

    리혜평%류학%장형월%곽항%조려정%류반%손수민%저려신%류연%류명원%왕학림

    旋毛虫%抗肿瘤%A200711基因%原核表达 鏇毛蟲%抗腫瘤%A200711基因%原覈錶達
    선모충%항종류%A200711기인%원핵표체
    目的 原核表达旋毛虫抗肿瘤基因A200711,并纯化该蛋白,CCK-8检测其对H7402人肝癌细胞的生长抑制作用.方法 PCR获得A200711基因片段,构建重组表达载体pET-28a(+)-A200711,转入大肠杆菌Rosetta(DE3).SDS-PAGE及Western blot检测IPTG诱导后重组菌,采用Ni-NTA亲合层析柱纯化并柱上复性目的 蛋白.细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测A200711蛋白对H7402细胞的生长抑制作用.结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-A200711,目的 蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE及Western blot分析显示,相对分子量约22 KD处出现目的 蛋白条带,与理论值相符;经Ni-NTA亲合层析柱获得了高纯度可溶性的A200711蛋白;H7402细胞增殖抑制率与A200711蛋白浓度存在量效关系,同时随作用时间的延长增殖抑制率也明显增加.结论 成功克隆、表达并纯化了旋毛虫A200711蛋白.A200711蛋白可抑制H7402细胞的增殖,且呈现时效和量效关系,本研究表明旋毛虫A200711蛋白作为潜在的抗肝癌生物制剂有进一步研究的价值.
    목적 원핵표체선모충항종류기인A200711,병순화해단백,CCK-8검측기대H7402인간암세포적생장억제작용.방법 PCR획득A200711기인편단,구건중조표체재체pET-28a(+)-A200711,전입대장간균Rosetta(DE3).SDS-PAGE급Western blot검측IPTG유도후중조균,채용Ni-NTA친합층석주순화병주상복성목적 단백.세포계수시제합(Cell Counting Kit-8,CCK-8)검측A200711단백대H7402세포적생장억제작용.결과 성공구건료원핵표체재체pET-28a(+)-A200711,목적 단백이포함체형식재대장간균중고효표체;SDS-PAGE급Western blot분석현시,상대분자량약22 KD처출현목적 단백조대,여이론치상부;경Ni-NTA친합층석주획득료고순도가용성적A200711단백;H7402세포증식억제솔여A200711단백농도존재량효관계,동시수작용시간적연장증식억제솔야명현증가.결론 성공극륭、표체병순화료선모충A200711단백.A200711단백가억제H7402세포적증식,차정현시효화량효관계,본연구표명선모충A200711단백작위잠재적항간암생물제제유진일보연구적개치.
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