华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2012年
2期
137-141
,共5页
陈庆%杨辰苏%陈虎%陈道达%龙跃平%郑海
陳慶%楊辰囌%陳虎%陳道達%龍躍平%鄭海
진경%양신소%진호%진도체%룡약평%정해
蛋白质转导结构域%凋亡素%肝癌
蛋白質轉導結構域%凋亡素%肝癌
단백질전도결구역%조망소%간암
目的 研究分泌型的含蛋白质转导结构域的凋亡素(PTD4-Apoptin)融合基因经人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达和分泌后,对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其用于肝癌治疗的可能性.方法 构建PTD4-Apoptin融合基因的pSecTag2分泌型真核表达载体,并采用脂质体介导将其转染入HUVEC细胞,Western blot检测PTD4-Apoptin融合蛋白的表达及分泌,转染48 h后收集培养上清作为条件培养液,用于HepG2、L02细胞培养,共培养24 h后,采用Western blot检测细胞内和核内Apoptin的含量,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 瞬时转染pSecTag2-PTD4-Apoptin的HUVEC细胞可表达及分泌PTD4-Apoptin融合蛋白,其培养上清中的PTD4-Apoptin融合蛋白可有效进入HepG2和L02细胞,并可在HepG2细胞核内聚积,显著诱导HepG2细胞凋亡达47.4%(P＜0.001),而对L02细胞无此效应.结论 HUVEC细胞表达分泌的PTD4-Apoptin融合蛋白可显著诱导邻近HepG2细胞凋亡,而对L02正常肝细胞无损伤.
目的 研究分泌型的含蛋白質轉導結構域的凋亡素(PTD4-Apoptin)融閤基因經人臍靜脈血管內皮細胞(HUVEC)錶達和分泌後,對人肝癌HepG2細胞凋亡的影響,探討其用于肝癌治療的可能性.方法 構建PTD4-Apoptin融閤基因的pSecTag2分泌型真覈錶達載體,併採用脂質體介導將其轉染入HUVEC細胞,Western blot檢測PTD4-Apoptin融閤蛋白的錶達及分泌,轉染48 h後收集培養上清作為條件培養液,用于HepG2、L02細胞培養,共培養24 h後,採用Western blot檢測細胞內和覈內Apoptin的含量,流式細胞術檢測細胞凋亡.結果 瞬時轉染pSecTag2-PTD4-Apoptin的HUVEC細胞可錶達及分泌PTD4-Apoptin融閤蛋白,其培養上清中的PTD4-Apoptin融閤蛋白可有效進入HepG2和L02細胞,併可在HepG2細胞覈內聚積,顯著誘導HepG2細胞凋亡達47.4%(P＜0.001),而對L02細胞無此效應.結論 HUVEC細胞錶達分泌的PTD4-Apoptin融閤蛋白可顯著誘導鄰近HepG2細胞凋亡,而對L02正常肝細胞無損傷.
목적 연구분비형적함단백질전도결구역적조망소(PTD4-Apoptin)융합기인경인제정맥혈관내피세포(HUVEC)표체화분비후,대인간암HepG2세포조망적영향,탐토기용우간암치료적가능성.방법 구건PTD4-Apoptin융합기인적pSecTag2분비형진핵표체재체,병채용지질체개도장기전염입HUVEC세포,Western blot검측PTD4-Apoptin융합단백적표체급분비,전염48 h후수집배양상청작위조건배양액,용우HepG2、L02세포배양,공배양24 h후,채용Western blot검측세포내화핵내Apoptin적함량,류식세포술검측세포조망.결과 순시전염pSecTag2-PTD4-Apoptin적HUVEC세포가표체급분비PTD4-Apoptin융합단백,기배양상청중적PTD4-Apoptin융합단백가유효진입HepG2화L02세포,병가재HepG2세포핵내취적,현저유도HepG2세포조망체47.4%(P＜0.001),이대L02세포무차효응.결론 HUVEC세포표체분비적PTD4-Apoptin융합단백가현저유도린근HepG2세포조망,이대L02정상간세포무손상.
