中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2004年
9期
515-518
,共4页
羊正纲%陈智%徐宁%倪勤%潘修成%金晗英%李敏伟
羊正綱%陳智%徐寧%倪勤%潘脩成%金晗英%李敏偉
양정강%진지%서저%예근%반수성%금함영%리민위
肝炎病毒,乙型%RNA干扰
肝炎病毒,乙型%RNA榦擾
간염병독,을형%RNA간우
目的构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发夹RNA(shRNA)表达载体,作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体,观察shRNA对融合蛋白的抑制作用,筛选出有效靶位.方法利用pAVU6+27质粒,设计并构建4个shRNA表达载体,与融合表达载体共转染AD293细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用.同时,逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性.结果成功构建shRNA表达载体和HBs-EGFP融合表达载体;4组shRNA表达载体均可不同程度抑制融合基因的表达,其中以579位点最有效,荧光表达抑制率为69.8%,RNA水平抑制率为74.6%.结论筛选出有效抑制HBV S基因的siRNA靶位.
目的構建4箇針對乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小髮夾RNA(shRNA)錶達載體,作用于增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)和HBV S基因融閤錶達載體,觀察shRNA對融閤蛋白的抑製作用,篩選齣有效靶位.方法利用pAVU6+27質粒,設計併構建4箇shRNA錶達載體,與融閤錶達載體共轉染AD293細胞,熒光顯微鏡下觀察融閤蛋白的熒光錶達情況併通過流式細胞儀分析shRNA對融閤蛋白的抑製作用.同時,逆轉錄聚閤酶鏈反應法驗證其篩選的有效性.結果成功構建shRNA錶達載體和HBs-EGFP融閤錶達載體;4組shRNA錶達載體均可不同程度抑製融閤基因的錶達,其中以579位點最有效,熒光錶達抑製率為69.8%,RNA水平抑製率為74.6%.結論篩選齣有效抑製HBV S基因的siRNA靶位.
목적구건4개침대을형간염병독(HBV)S기인서렬적소발협RNA(shRNA)표체재체,작용우증강형록색형광단백(EGFP)화HBV S기인융합표체재체,관찰shRNA대융합단백적억제작용,사선출유효파위.방법이용pAVU6+27질립,설계병구건4개shRNA표체재체,여융합표체재체공전염AD293세포,형광현미경하관찰융합단백적형광표체정황병통과류식세포의분석shRNA대융합단백적억제작용.동시,역전록취합매련반응법험증기사선적유효성.결과성공구건shRNA표체재체화HBs-EGFP융합표체재체;4조shRNA표체재체균가불동정도억제융합기인적표체,기중이579위점최유효,형광표체억제솔위69.8%,RNA수평억제솔위74.6%.결론사선출유효억제HBV S기인적siRNA파위.
