CAJ | 학술논문

构建重组原核表达载体pET32a-VP73,将pET32a-VP73转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导,VP73蛋白主要抗原表位区可稳定高效的表达,SDS-PAGE结果表明,IPTG终浓度为1.0 mmol/L,诱导5h蛋白质表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,分子质量约为42 ku.蛋白质纯化后,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,确定表达产物为非洲猪瘟病毒VP73主要抗原表位区融合蛋白.将纯化的蛋白质免疫新西兰大白兔,免疫前后收集血清.用间接ELISA方法测定血清抗体效价,并以非洲猪瘟阳性血清、兔免疫前后血清及猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病阳性血清为一抗,确定该蛋白质的特异性.结果表明,制备的抗血清效价达到1∶1024000,能与纯化的VP73主要抗原表位区蛋白质发生反应.制备的多克隆抗体为VP73蛋白的免疫学研究和非洲猪瘟血清学诊断奠定了基础.
구건중조원핵표체재체pET32a-VP73,장pET32a-VP73전화BL21감수태세포,경IPTG유도,VP73단백주요항원표위구가은정고효적표체,SDS-PAGE결과표명,IPTG종농도위1.0 mmol/L,유도5h단백질표체량최고,표체단백위융합단백,분자질량약위42 ku.단백질순화후,경SDS-PAGE급Western blotting감정,학정표체산물위비주저온병독VP73주요항원표위구융합단백.장순화적단백질면역신서란대백토,면역전후수집혈청.용간접ELISA방법측정혈청항체효개,병이비주저온양성혈청、토면역전후혈청급저온、저번식여호흡종합정、저위광견병양성혈청위일항,학정해단백질적특이성.결과표명,제비적항혈청효개체도1∶1024000,능여순화적VP73주요항원표위구단백질발생반응.제비적다극륭항체위VP73단백적면역학연구화비주저온혈청학진단전정료기출.